ELISA法对血清结核抗体的检测及相关分析.docVIP

精品论文 参考文献 ELISA法对血清结核抗体的检测及相关分析 樊少勇 （广西玉林市第一人民医院检验科 537000） 【中图分类号】R446.11 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）04-0005-01 【摘要】 目的 探讨和研究酶联免疫吸附试验（ELISA）对结核分枝杆菌H37RV多肽（TB4）的检测价值。方法 采用ELISA法对37例肺结核患者（观察组）、37例健康体检者的血清抗结核抗体水平进行检测，以TB4为包被抗原计算诊断试验的相关指标。结果 TB4抗原在ELISA检测结核病的敏感性为78.38%（29/37）；特异性为94.59%（35/37）；阳性、阴性预测值分别为91.89%和86.49%，准确率为86.49%。结论 ELISA法进行以TB4为抗原的血清抗结核抗体检测的准确率较高，可以在临床上作为结核病的辅助诊断。 【关键词】 结核分枝杆菌H37RV多肽 酶联免疫吸附试验 血清抗结核抗体一直是临床上作为结核病血清学辅助诊断的重要指标，酶联免疫吸附试验（ELISA法）就是检测方法之一，由于抗原的特异性和敏感性都关系到了诊断率，所以分析其检测价值是十分必要的。笔者采用结核分枝杆菌H37RV多肽（TB4）作为包被抗原进行ELISA法的检测，现报道如下。 1 临床资料与方法 1.1 临床资料 37例肺结核患者血清由当地疾病防控中心提供，其中14例患者痰涂阳，23例痰涂阴，患者年龄在21-64岁之间，平均年龄42.1plusmn;9.9岁，以此为观察组；同时摘取我院同期37例进行健康体检者作为对照组，年龄在20-60岁之间，平均年龄44.1plusmn;9.4岁。两组患者在一般资料对比上无明显差异，不具有统计学意义（P＞0.05）。 1.2 方法 1.2.1 包被抗原 将每孔加入100ml稀释抗原，放置于4℃冰箱冷藏，过夜之后取出用PBS进行洗涤3次，每次3-5min备用。 1.2.2 封闭 将每孔加入100mlBSA置于室温下孵育1h，将所有非特异性结合点位封闭，之后进行洗涤3次，每次3-5min。 1.2.3 血清反应 将1：100比例的血清稀释液分别加入每孔之中，同时加入过氧化物酶作用底物羊抗人IgG，放置于室温下进行孵育1h，之后洗涤3次，每次3-5min。 1.2.4 底物反应 将每孔中加入配置好的TMP底物100ml，放置于室温下孵育15min，之后将每孔中加入50ml H2SO4终止反应。 1.2.5 采用酶标仪（美国产ELX800NB型酶标仪）进行检测，波长调整在450nm进行OD值的读取，以被检标本复孔OD值与阴性参考血清的OD值进行对比，2:1则为阳性。 2 结果 TB4抗原在ELISA检测结核病的敏感性为72.97%（27/37）；特异性为94.59%（35/37）；阳性、阴性预测值分别为93.10%[27/（27+2）]和77.78%[35/（35+10）]，准确率为83.78%[(27+35)/74]。 表1 两组受检者血清抗体的检测结果统计 3 讨论 目前对于结核病检测方面血清学检测方法遇到的最大难题就是对于检测抗原的特异性，许多文献指出[1]检测结核病时选取的是分支杆菌纯蛋白衍生物以及脂阿拉伯甘露糖的抗体，但是效果并不理想。本文采用的结核分枝杆菌H37RV多肽（TB4）抗体作为检测抗原尚属少数，从本文的检测结果来看，TB4抗原在ELISA检测结核病的敏感性为72.97%（27/37）；特异性为94.59%（35/37）。这个数据明显高于临床上的一些以PPD抗体的报告数据，而与以LAM抗体为检测抗原的Sade等人[2]的报道结果相近，这说明结核分枝杆菌H37RV多肽（TB4）作为结核病的血清学检测抗原具有较高的价值。 有文献指出[3]，TB4和其他的分支杆菌多肽抗原相比，分子量在34-40kD之间的多肽只能和少数的分支杆菌存在交叉免疫反应，这属于比较特殊的多肽成分，而且经证明是和特异性诊断相关的抗原成分，笔者采用TB4作为抗原进行检测也证明了这一点。在传统的实验室诊断方法中，镜检的阳性率仅在20%左右，虽然结核菌素试验阳性率较高，但是存在有假阳性较多的问题，严重的影响了实验结果的准确性，而且培养时间较长，往往不能及时为临床提供可靠的依据。因此近年来对于新的检测方法的寻找，国内外学者都在进行，ELISA法进行血清抗结核抗体的检测最早是Nassau[4]应用于临床的，这种方法简单易行，试验费