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ADSCs在脂肪移植中的应用与研究

精品论文 参考文献 ADSCs在脂肪移植中的应用与研究 暴志国 张建文(通讯作者) 王琪影 张歌 王琰   (解放军第153医院 激光整形美容中心 450007)   【摘要】目的:探讨ADSCs在脂肪移植当中的应用与研究。方法:1利用消化法提取ADSCs(ADSCs)在DMEM完全培养液基中培养、传代,收集第3代细胞作为种子细胞。2 细胞+生物支架复合物取材、制备和植入。脂肪颗粒做为支架材料和种子细胞混合制成细胞-生物支架复合物,实验分3组:组①ADSCs按25times;106个/ml浓度与脂肪颗粒1:1混合;组②单纯脂肪颗粒;组③单纯ADSCs配制成浓度12.5times;106个/ml浓度。按每一样本0.2ml注射到裸鼠(12只,6w雄性)背部皮下,形成3个点,每组各1个点,3个月后分别取材分析。结果:三组均可见有新生组织形成, Masson三色染色染色法中三组中均可见脂肪细胞及胶原蛋白。三组中体积组①gt;组②gt;组③,质量组①gt;组②gt;组③,P值lt;0.05。RT-PCR示三组中均见到人类mRNA表达。Western blot示三组中均可见I型胶原蛋白表达。结论:ADSCs可促进局部血管形成,减少游离移植脂肪的吸收,促进局部胶原蛋白形成,在局部微环境的诱导下向脂肪细胞分化的趋势。   【关键词】ADSCs 组织工程技术 脂肪移植 胶原蛋白含量   【中图分类号】R62 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085(2014)17-0104-02   脂肪移植已有100多年历史,自体脂肪移植以其无排异反应,无免疫原性,可在体内长期存活等无可替代的优点备受广大求美者和医生的青睐。被广泛应用于修复体表软组织缺损。随着脂肪移植应用范围扩大其不足之处逐渐显现出来,高吸收率,可达60%~70%,移植中心部位会出现坏死纤维化、液化、钙化等现象,使脂肪移植受到一定的限制。如何减少移植脂肪细胞的液化吸收,增加成活率成了很多整形医生的研究课题。2001年,Zuk4等从游离脂肪组织中成功分离培养出具有向骨、软骨、脂肪、肌肉等多向分化潜能的细胞,人们对ADSCs有进一步的认识并迅速应用到组织工程种子细胞研究领域。ADSCs的多向分化潜能也被许多研究所证实。但是,目前对ADSCs在体内环境下的安全性、可控性尚无定论,有待进一步研究,本实验应用组织工程技术,选择脂肪颗粒为支架材料,以ADSCs为种子细胞构建种子细胞+支架复合物,移植在裸鼠体内,观察种子细胞+支架复合物在宿主体内的生长情况。   1 材料与方法   1.1试剂 II型胶原酶(美国gibco)、DMEM培养液(美国 gibco)、胎牛血清(美国HyClone)、PBS液、胰蛋白酶(北京Solarbio)、碱性成纤维细胞生长因子(北京双鹭药业)。   1.2主要器材   超声组织匀浆机、 纯水系统、恒温CO2培养箱、低温台式离心机、精密天平、恒温摇床、倒置相差显微镜、超净工作台、培养瓶、离心管、脂肪抽吸针等。   1.3实验动物:BALB/c Nude裸鼠,12只5w龄,雄性,有北京维通利华实验动物技术有限公司提供,在河南省动物实验中心饲养。   1.4细胞培养   脂肪组织来源于吸脂塑型的求美者。抽取部位为双下肢股外侧及股后侧脂肪。以消化法提取ADSCs,取第3代细胞作为实验种子细胞。将ADSCs配置成25times;106个/ml浓度备用。   1.6 干细胞表面标志物鉴定:   ADSCs是一组来源于脂肪组织的混合干细胞群,流式细胞仪测定细胞表面抗原简单,易于操作,灵敏可靠。   1.7 ADSCs移植   抽取股外侧脂肪,去红细胞,脂肪颗粒与ADSCs混合制成细胞-生物支架复合物。实验分3组:组①ADSCs按25times;106个/ml浓度与脂肪颗粒等体积混合;组②单纯脂肪颗粒;组③单纯ADSCs。按每一样本0.2ml注射到裸鼠(12只,6w雄性)背部皮下,3个月后取材检测分析。   1.8 Masson三色染色法   Masson三色染色法印染标本组织,明确组织成分。读片:胶原蛋白呈蓝色,脂肪呈空泡状,肌肉组织呈红色,细胞核呈紫红色。   1.9 通过RT-PCR测定新生组织染色体 ZFXmRAN   收集标本,提取RNA,纯化。采用Gel Doc 2000凝胶图像分析仪采集图片,Quantity One分析软件对条带进行分析,基因编码区的引物序列由,有上海捷瑞生物工程有限公司设计合成。   上游引物ZFXsense5rsquo;-AAGGTTCCCCTGGACGAGAC-3rsquo;   下游引物ZFXantisense

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