UPLC-MS在芳香植物减肥成分提取中的实验分析.docVIP

精品论文 参考文献 UPLC-MS在芳香植物减肥成分提取中的实验分析 包其 张海洲 (苏州大学附属第一医院 江苏苏州 215006) 【摘要】通过UPLC-MS法提取芳香植物水中的有效化学成分分析，为该配方提取物的进一步开发利用提供了重要理论依据。 【关键词】芳香植物 减肥 UPLC-MS 化学成分 【中图分类号】R914 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）11-0390-01 从芳香植物中寻找有效的天然物质既能达到减肥的目的，又不影响健康，通过口服途径，控制、减轻肥胖人群的体重被认为是最安全可靠的减肥方法。因此如何筛选并开发出功能因子明确、含量可以测定、作用机理清楚、临床效果肯定的具有减肥作用的功能食品已成为全社会关注的热点。 1 UPLC-MS 在天然产物成分分析中的应用 高效液相色谱法（HPLC）是用液体作为流动相的色谱技术，它不受待测物挥发性和热稳定性的制约，适用于目前已知的80％的有机化合物的分离，其分析速度快，分离能力强，测定灵敏度高，应用范围极广。待测组分经液相色谱柱分离后，经紫外检测器、二极管阵列检测器、荧光检测器、视差折光检测器等多种检测器进行检测，达到定性定量的目的。超高液相色谱（UPLC）是HPLC的一种，与传统的HPLC相比，该系统因为具有更高的处理能力、灵敏度和峰容量。超高效液相色谱-质谱法（UPLC-MS）是基于小颗粒填料和LC原理的一种创新方法，是结合了UPLC的高效分离能力与MS的高灵敏度和极强的专属性的分离检测技术，它具有应用范围广、分离能力强、灵敏度高、分析速度快和自动化程度高等优点。由于天然产物提取物中的同类化合物在化学结构上很相似，因此可以对数个已知单体化合物进行质谱裂解分析，研究这一类化合物的裂解特征以及结构上的细微差异引起的裂解行为的不同，总结出基于结构特征的质谱碎裂规律，然后利用这个规律，根据这类化合物未知成分的质谱裂解特征直接推断其化学结构。 2 UPLC-MS 分析提取物主要化学成分 2.1 材料 将具有减肥作用的植物材料在50℃留香干燥4h制成干材料，按照配方调配植物材料，精确称取300g置于小型常压蒸馏提取装置中，加蒸馏水2.5L完全浸没植物材料，冷浸30min，100℃蒸馏提取60min，双层纱布过滤收集滤液，55-60℃减压旋蒸浓缩，-80℃冰箱冻存过夜，-55℃、0.125mbar真空冻干，研磨得到提取物粉剂，4℃保存备用。 2.2 试剂 超纯水（色谱纯），甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯）。 2.3 仪器 超高效液相色谱—四级杆飞行时间质谱联用仪，万分之一分析天平，电热干燥箱，移液器。 2.4 方法 2.4.1 样品的制备 称取 1g 配方提取物样品溶解在 20ml 超纯水中，充分搅拌溶解，滤纸过滤，收集续滤液，0.45mu;m 微孔滤膜过滤，得到提取物水溶液测试样品。称取1g 配方提取物样品溶解在 20ml 甲醇中，超声提取 30min，滤纸过滤，收集续滤液，0.45mu;m微孔滤膜过滤，得到提取物醇溶液测试样品。 2.4.2 色谱条件 ACQUITY UPLC，BEH C18 色谱柱，1.7 mu;m，2.1times;100mm Column；进样量 5mu;l，柱温 40℃，流速 0.4mlbull;min-1；流动相：溶剂 A：超纯水；溶剂 B：乙腈/甲醇 = 1/1。 2.4.3 质谱条件 电喷雾负离子模式检测；扫描范围为 m/z 50.0~1200.0，毛细管电压 3.0 kV，抽提电压 4.0V，锥孔电压 55V，喷雾气流量 50 Lbull;h-1，脱溶???气流量 400 Lbull;h-1，离子源温度 110℃，脱溶剂温度 300℃，氩气作为碰撞气体，碰撞能量 6 eV。 2.5 结果 通过对提取物水溶液的 UPLC 色谱图、在负离子模式下的总选择离子流图及主要化合物的二级质谱图分析可得出提取物水溶液主要化学成分信息，迷迭香酚（2.95%）、迷迭香酸（1.73%）、木犀草素-7-葡糖醛酸苷（1.25%）、鼠尾草酚（0.40%）。同理，可得出提取物醇溶液化学成分分析见下表： 3 结束语 通过对天然植物配方中提取物有效成分的分离和鉴定，可以从有效成分中深入挖掘新的具有减