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不同标本前处理方法对乳汁HBV DNA检测的影响分析
精品论文 参考文献
不同标本前处理方法对乳汁HBV DNA检测的影响分析
广西灵山县妇幼保健院 535400
【摘要】:目的 探究分析不同标本前处理方法对乳汁HBV DNA检测的影响。方法 回顾性分析于我院分娩的95例产妇,所有产妇均为血清乙型肝炎e抗原、乙型肝炎核心抗体阳性、乙型肝炎表明抗原阳性,标本选为产妇乳汁,置于冰箱,在4℃条件下过夜,取中间层乳汁,分别采用沉淀检测、上清液浓缩检测及上清检测法对乳汁HBV DNA水平进行平行检测。结果 沉淀检测法在HBV DNA阳性检出率方面均高于其他两种方法,在HBV DNA对数浓度方面检测,沉淀检测法平均值均高于其他两种方法,以上差异均有统计学意义,P<0.05。结论 乳汁在冰箱内4℃条件下过夜后,离心中间层乳汁,采用沉淀法检测的准确率最高,且操作简便。
【关键词】: 乳汁;HBV DNA;标准前处理方法
乙型肝炎携带者在孕妇中所占比例较多,约为10%~20%,这些患者在产后实施母乳喂养,能否直接导致新生儿乙型肝炎感染,尚无准确定论。因此,要定量检测乳汁HBV DNA。 关于HBV DNA检测文献有很多,但未详细阐明标本检测方法。现回顾性分析于我院分娩的95例产妇,用三种方法对其乳汁标本进行检测,现具体报道如下:
1资料与方法
1.1一般资料
选取2015年3月~2016年3月于我院分娩产妇95例,所有患者均为血清乙型肝炎e抗原、乙型肝炎核心抗体阳性及乙型肝炎表面抗原阳性。年龄23~33岁,平均年龄(26.72plusmn;3.57)岁。产妇分娩2~3d后,取3~4ml初乳,取前要清洗产妇乳头,置于干燥、无菌试管内,放入温度条件为4℃的冰箱内,过夜,以备后用。
1.2方法
1.2.1沉淀检测
去除过夜后标本的上层乳酪,取中层乳汁100Mu;l,置于无菌Ep管,温度4℃条件下离心处理,转速15000r/min,时间10min,将上清液去除,将100mu;LDNA提取液置入。
1.2.2上清液浓缩检测
取100mu;L中间层上清液,将试剂盒内自带浓缩液100mu;L注入,温度4℃条件下混合离心,转速15000r/min,时间10min,将上清液去除,将100mu;LDNA提取液置入。
1.2.3上清液检测
取过夜后的乳汁800mu;L,置入无菌EP离心管,温度4℃条件下离心,转速15000r/min,时间10min,将脂肪层去除,抽取100mu;L中间层上清液,将100mu;LDNA提取液置入。
检测仪器选用ABI 9700荧光定量PCR仪(美国公司生产,北京代理),对三种处理方法的HBV DNA水平进行观察比较。检测试剂盒(上海纪宁生物科技有限公司),5times;102copy/ml为检出限度,室内质控血清由卫生部临床检验中心提供,参照试剂说明书,检测提取后的DNA样本。
1.3观察指标
对三种标本前处理方法的HBV DNA对数浓度平均值与阳性率进行观察和比较。
1.4统计学分析
对本组研究的数据采用SPSS11.0统计学软件进行分析,正态计量资料采用“plusmn;s”表示,组间比较用t检验;计数资料用例数(n)表示,计数资料组间率(%)的比较用chi;2检验;以P<0.05为差异具有统计学意义。
2结果
三种不同处理法对数浓度平均值与阳性检出率方面的比较,沉淀检测法的对数浓度平均值与阳性检出率均高于其他两组,差异有统计学意义,P<0.05,见表1。
表1 三种标本前处理方法的检测结果对比分析
3讨论
血清是检测HBV DNA水平的重要标本[1]。就血清标本处理来看,试剂说明书均配有详细的说明。然而,在现阶段尚未有统一的关于乳汁标本处理方法,不同标本??理方法的检测结果存在的差异性较为显著。
有研究[2]指出,乳汁标本处理方法与血清标本处理方法类似,操作流程为现将乳汁标本离心,然后去除上层脂肪,抽取中间层乳清液,最后进行检测。本文用沉淀法、上清液压缩法及上清液三种不同标本前处理法对乳汁标本进行处理,并进行检测,结果发现,三种方法中沉淀法的阳性检出率最高为89.47%,与蒋雪纷[3]研究的90.00%基本一致。存在差异的主要原因,可能与选取产妇的例数有关。且沉淀法检测对数浓度平均值均高于其他两种方法,结果提示沉淀法的精确度高。
总之,在三种不同标本前处理方法中,采用沉淀法可准确的检出乳汁HBV DNA水平,操作简单,具有临床推广和应用价值。
【参考文献】:
[1]杨国庆.标本前处理方法对乳汁HBV DNA检测的影响[J].世界最新医学信息文摘,2015,15(28)
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