灰色链霉菌产链霉素汇报、.pptVIP

* * * 灰色链霉菌产链霉素 实验背景 实验方法 实验结果 结论 讨论 A B C D E Contents 目 录 一、实验背景 灰色链霉菌是一种放线菌，而高氏一号斜面培养基是一种合成培养基，可用于培养放线菌。种子扩大培养是发酵工程的一个组成部分，指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。 种子扩培的一般过程是： 斜面菌种 → 一级种子培养（摇瓶） → 二级种子培养(种子罐) → 发酵。根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。 二、实验方法 1、灰色链霉菌的活化 1.1 培养基的制备 本实验原计划采用高氏培养基活化菌种，后因效果不佳，改用PDA培养基培养。因此制备PDA培养基。 1.2 斜面接种 1) 左手拿试管菌种，右手拿接种环，先将金属环烧灼灭菌，再将接种环在空白培养基处冷却，挑取菌落，在火焰旁稍等片刻 2) 左手将试管菌种放下，拿起斜面培养基。在火焰旁用右手小指和手掌边缘拔下棉塞并夹紧，迅速将接种环伸入空白斜面，在斜面培养基上轻轻划线，将菌体接种于其上。划线时由底部向上划一直线，一直划到斜面的顶部。注意勿将培养基划破，不要使菌体沾污管壁。 3）灼烧试管口，在火焰旁将棉塞塞上。接种完毕，接种环上的余菌必须灼烧灭菌后才能放下。 4）斜面置于28℃恒温箱中，培养2~3d观察结果。 4、枯草芽孢杆菌的活化 将配制好的蛋白胨牛肉膏培养基斜面接种枯草芽孢杆菌，方法同灰色链霉菌活化方法相同。28℃培养24h。 5、链霉素活性的鉴定 5.1 枯草芽孢杆菌悬液制备 加入1ml生理盐水于枯草芽孢杆菌斜面中，轻轻冲下菌落，取至新的灭菌的1.5mlEP管内，备用。 5.2 枯草芽孢杆菌悬液的稀释 用生理盐水将悬液分别稀释5倍和10倍，备用。 5.3 涂平板 将制备好的不同浓度的枯草芽孢杆菌悬液涂布于4个制备好的LB平板，浓度分别为原液、5倍、10倍，第4个平板作为阳性对照，悬液浓度为原液。 5.4 打孔 将涂布好的平板用1ml枪头打3个孔，孔径光滑均一。 5.5 加样 将发酵液取10ml于10mlEP管内，2000r/mim离心5min，取上清加于每个孔内，加满为止，但不能溢出。阳性对照的孔内加入一定浓度的链霉素液。 37℃培养12h，观察抑菌效果。 实验材料的准备 1、实验器材 天平、500mL刻度量杯、小刀、牛角匙、玻棒、纱布、18mL×180mL试管、棉花、电炉、烧杯、报纸、记号笔、酒精灯、接种环、250/500ml三角瓶、棉花、电炉、烧杯、记号笔、酒精灯、接种环、涂布棒、旋转式摇床、4℃冰箱、37℃孵箱、各型号移液枪及枪头、超净工作台等。 2、斜面培养基的制备 2.1 高氏培养基：可溶性淀粉20g，硝酸钾1 g，氯化钠0.5 g，磷酸氢二钾0.5 g，硫酸镁0.5 g，硫酸亚铁0.01 g，琼脂20 g，水1000毫升，PH7.2—7.4（配制时注意，可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中）。 2.2 PDA培养基：淀粉含量高的土豆、葡萄糖、琼脂。将土豆切成小块，煮烂用纱布滤出土豆汁。将1000ml的土豆汁中加入葡萄糖20g，琼脂15-20g。 2.3 种子液的制备 豆饼粉20g、淀粉40g、酵母膏5g、蛋白胨5g，硫酸铵3g，硫酸镁0.25g，磷酸二氢钾0.2g，碳酸钙4g，自来水1000mL、pH7.2-7.4。 2.4 发酵液的制备 水解糖160g、尿素5g（单独灭菌）、MgSO40.5g、Na2HPO41.6g、玉米浆25~35g、FeSO4和MnSO4各20mg/L，消泡剂0.3g，，水1000mL， pH7.2。 三、实验结果 1、灰色链霉菌的活化 管中可见成片白色菌落，并且管底含有水。 2、种子液的制备 3、链霉菌的发酵 4、枯草芽孢杆菌活化 由于斜面培养基太软，划线的时候破坏了培养基，菌落也成片。 5、链霉素的活性鉴定 测得抑菌圈直径为 1.2cm1.2cm,1.4cm 平均值为1.27cm 枯草芽孢杆菌原液涂板所得抑菌圈图片 * * * * 模板来自于 / *