高三生物《DNA的粗提取与鉴定》(课件).ppt

（三）去除滤液中的杂质 　　为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理。 讨论 　　此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ （三）去除滤液中的杂质 　　答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质 　　为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理。 讨论 　　此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ 湖南长郡卫星远程学校 2009年下学期 制作 03 DNA的粗提取与鉴定 　　构成生物体的遗传物质是什么？ 讨论１： 　　构成生物体的遗传物质是什么？ 　　怎样才能将细胞内的遗传物质分离出来？ 讨论2： 讨论１： 基础知识 提取DNA的方法 2. DNA的溶解性 　　DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反。 　　①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？ 　　①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？ 　　在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而　　　　　　　　逐渐降低; 在0.14 mol/L　　　　　　　　时，DNA溶解度最小；　　　　　　　　当NaCl溶液浓度继续增　　　　　　　　加时，DNA的溶解度又　　　　　　　　逐渐增大。 　　②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ 0 溶解度 NaCl浓度 0.14mol/L 2mol/L 　　②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ 　　当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0.14 mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出。 3. DNA在酒精溶液中的溶解性 　　DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离。 4. DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 4. DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 4. DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 ②大多数蛋白质不能忍受60－80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性 4. DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 ②大多数蛋白质不能忍受60－80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性 ③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响 5. DNA的鉴定 5. DNA的鉴定 ①DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二笨胺可以作为鉴定DNA的试剂。 5. DNA的鉴定 ①DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二笨胺可以作为鉴定DNA的试剂。 ②甲基绿（蓝绿色） 　　通过利用不同浓度NaCl溶液溶解或析出DNA，可以从细胞中提取和提纯DNA；再利用酒精进一步将DNA与蛋白质分离开来，达到提纯的目的；最后利用二苯胺试剂鉴定提取的物质是否是DNA。 原理总结 （一）实验材料的选取 实验设计 1.材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体中培养基的培养的大肠杆菌。（从中选取2~3种实验材料） 2.原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1.动物细胞 　　动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。 讨论 为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 讨论 为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 　　答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂（细胞膜和核膜的破裂），从而释放出DNA。 ①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜 2. 植物细胞 讨论 加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 讨论 加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 　　答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。 ①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜 2. 植物细胞 ②实例：　　提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液 讨论 　　如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ 讨论 　　如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ 　　答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不