2015年一轮复习动物细胞工程课件2.ppt

2.2.2动物细胞融合和单克隆抗体 细胞融合是正常的生命活动 正在融合的两个细胞 受精作用 一、动物细胞融合 3.过程： 1.概念： 两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程 融合 含不同DNA的两个细胞 有丝分裂 杂交细胞 2.原理： 细胞膜的流动性 思考题 植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？ 酶解法，如纤维素酶,果胶酶 动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？ 无需，因为动物细胞无细胞壁 植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？ 离心、电激等物理方法；PEG等化学方法 动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？ 能 还可以利用灭活的病毒进行诱导 植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？ 不能 诱导方式 物理法 化学法 生物法： 灭活的病毒 仙台病毒 紫外线 丧失感染性 （不感染细胞） 保留融合活性 （诱导细胞融合） 诱导方法 灭活：指用物理或化学手段使病毒失去感染能力，但是并不破坏这些病原体的抗原结构 植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 过程 原理 细胞融合的过程 诱导方法 用途 细胞膜的流动性、细胞的全能性 细胞膜的流动性 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 物理、化学方法 物理、化学、生物方法 获得杂种植株 制备单克隆抗体 细胞融合， 植物组织培养 细胞融合 意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段 特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体 2、什么是抗体？ 二、单克隆抗体 回顾 3、抗体的分布？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 主要分布在血清中。 1、什么是克隆？ “克隆”从英文“clone”音译而来，是指从一个共同祖先，通过无性繁殖的方法产生出来的一群遗传特性相同的DNA分子，细胞或个体。在细胞水平指动物细胞培养. 自主阅读P52：抗体的传统生产方法及缺陷是什么？ 抗体的传统生产方法 从血清中分离抗体 该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。 多种效应B细胞 动物体内 多种抗体 抗原 为什么传统抗体制备会有这些缺陷呢？ 这和B淋巴细胞的特点有关 B淋巴细胞特点 ３．每一个B淋巴细胞只能产生一种抗体。 １．B淋巴细胞受抗原刺激后，可以 产生抗体。 ２．动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。 因此要想获得大量的单一抗体，怎么呢？ 二、单克隆抗体 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体 称为单克隆抗体。 1、概念: 怎样才能大量生产单克隆抗体？ 提示1：仅用细胞培养技术可行吗？ 提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？ 提示3：有什么方法能使B细胞产生抗体的能 力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？ 大量生产单克隆抗体思路 B淋巴细胞具产生抗体的功能 骨髓瘤细胞具无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和骨髓瘤细胞特性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 B淋巴细胞 注射特定抗原蛋白 骨髓瘤细胞 培养骨髓瘤细胞 融合 （只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？融合细胞几种类型？ 骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞 B淋巴细胞--- B淋巴细胞 B淋巴细胞---骨髓瘤细胞 多种杂交细胞 在具有筛选作用的培养基上培养 专一抗体检验阳性 克隆上述杂交细胞 分开不同杂交细胞，克隆专一抗体， 检验阳性细胞 单克隆抗体 注射到小鼠体内 体外培养 2、单克隆抗体的制备过程 第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。 第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。 该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。 杂交瘤细胞有何特点？ 特异性强，灵敏度高 免疫小鼠 培养骨髓瘤细胞 融合 骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 注射特定抗原蛋白 选择培养基上培养 专一抗体检验阳性 专一抗体检验阳性 注射到小鼠体内 体外培养 单克隆抗体 克隆杂交细胞 分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞 多种杂交细胞 杂交瘤细胞有何特点？ 本过程利用的那些技术？ 动物细胞融合技术 动物细胞培养技术 是否注射抗原 （只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？几种融合细胞？ 两次筛选的目的分