胰岛素环境对子代生长发育影响及代谢程序化改变研究.pdf

138 华东地区第十届实验动物科学学术交流会 胰岛素环境对子代生长发育影响及代谢程序化改变 陶凌云n2，邵伟娟。2。冷雪梅，，高诚t，胡建华1 (1．上海实验动物研究中心，2．上海市计划生育科学研究所，上海，200032，3．扬州大学兽医学院) 【摘要]目的 利用小鼠胚胎体外培养技术，探讨胰岛素对子代生长发育的影响及子代产生代谢 程序化的改变。方法 将小鼠2．细胞胚胎培养于KsOM+O．25斗咖l胰岛素的培养基内，发育至 囊胚，转移到假孕母鼠子宫。产下F1代，Fl代成年后(6周龄)，远交产下F2代。取F1、F2代成 年鼠，分别做1：2服葡萄糖耐量(GTT)和胰岛素耐量(ITT)试验；并测定血清葡萄糖和胰岛素浓度。 结果 胰腺凋亡细胞明显增多，口服葡萄糖和胰岛素耐量损伤，F2代成年小鼠胰岛素耐量损伤，产生胰 岛素抵抗。结论胰岛素能促进旱期胚胎过生长，造成成年后F1、F2代小鼠胰岛素抵抗和代谢 程序化改变。 【关键词]胰岛素；葡萄糖耐量试验；胰岛素耐量试验；代谢程序化 激素和生长因子与胚胎发育密切相关，它们在哺乳动物植入前胚胎的代谢调节中起着很重要的作用， 调节着各个器官系统的发育和分化。前列腺素和胰岛素影响植入前胚胎的糖代谢，其中，胰岛素(Insulin) 能促进胎儿的生长发育，胰岛素作为母源性因子，与相关受体结合后，可影响胚胎发育I¨l，试验表明，人 类和其它哺乳动物胎儿血清中的胰岛素水平与胎儿初生重及体高呈正相关【5】，在子宫内，胰岛素发挥着代 谢和生长促进的角色。 一 大量的文献资料证明，胰岛素能促进植入前胚胎的发育，如增加囊胚细胞数量、升高有丝分裂指 数、改变形态学和刺激蛋白合成等16,-101，但这些均是短期效应，胰岛素对胚胎各期的合成代谢能否产生 长期的效应，也就是说这种对营养性应激或刺激的早期适应能否持续改变成年后机体的生理和代谢还不清 楚。为此，本试验利用小鼠胚胎体外培养技术，将2．细胞胚培养在含有0．25 gg／ml胰岛素培养基内， 代谢指标，以研究胰岛素对阜期胚胎发育影响具有程序『匕的改变。 1材料与方法 1．1材料 h后再次腹腔注射8IU l-1．1动物和实验设计6胡周龄SPF级ICR雌性小鼠，腹腔注射8IUPMSG，48 d hCG，注射后小鼠即与正常雄性小鼠1：1合笼。次日检查阴栓，阳性者定为受孕0．5d，取受孕1．5 小鼠的输卵管，从伞端冲出胚胎，收集2．细胞胚胎，将胚胎等分为实验组和对照组二份，对照组置于 h，胚胎发育至囊胚后， KSOMt¨】，实验组置于KSOM+0．25“g／ml胰岛素37℃、5％C02培养箱孵育48 计算囊胚发育率(囊胚数／2细胞数)，并转移至假孕母鼠子宫#J(10个／侧)，产下小鼠为F1代，称初生重， F1代成年后，远交产下F2代，称初生重。分别检测Fl和F2代成年小鼠血清葡萄糖和胰岛素浓度，并 取成年鼠作口服葡萄糖耐量和胰岛素耐量试验。 动物饲养于清洁级环境，密度≤5只／盒，温度20—24℃，相对湿度40％—60％，喂以配方饲料，自由采食 射免疫分析药盒，北京科美东雅生物技术有限公司；胰岛素(Sigma，16634)；KSOM培养基111]。 华东地区第十届实验动物科学学术交流会 139 Axio光学显微镜；Stemi 1．1．3主要仪器罗l羌(Accu．Chek)血糖测定仪；SN．695A智能放免悴饬恳牵絷eiss 2000C，Zeiss解剖镜。 1．2实验方法 1．2．1 囊胚发育率和初生重的测定将2．细胞胚胎体外培养24h，解剖镜下观察，计细胞囊胚数，与开 始培养的2．细胞胚胎数之比，即为囊胚发育率。以见阴栓O．5d