鸭瘟弱毒疫苗诱导免疫鸭细胞和体液作用的研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会 生产的禽重组IFN。其抗病毒活性降低或丧失。其具体原因有待进一步研究。 参考文献略 鸭瘟弱毒疫苗诱导免疫鸭细胞和体液作用的研究 程志萍1，程安春’t汪铭书’L2，陈斌L3，刘阐-，段坤-，周雪·j陈孝跌1-2 (1．四川农业走学动物科技学院禽病防治研究中心，四川雅安，625000：2动物疫病与人类健康四川省重 点实验室．四川雅安，625000；3．四川省兽医防疫总站，四川成都，610041) 摘要将鸭瘟弱毒疫苗用肌肉注射免疫28日龄鸭，接种后采血用淋巴细胞增殖试验(MTT法)测定鸭 外周血T淋巴细胞转化；用流式细胞仪(FAcs)测定cD，T淋巴知胞数量的动态变化：用间接ELIsA法检 测血清抗体水平．结果表明：免疫组鸭T淋巴细胞时corLA的反应能力于2lt8d显著(唧．05)高于空白 d 对照组；外用血cD，+T淋巴细胞数量于2l一28d极显著‘唧，01)高于空白对照组；血清抗体水平在28 时达到峰值．并于l扣182d棱显著(唧．叭)或显著(P郢．05)高于空白对照组．表明．鸭瘟弱毒疫苗免 疫鸭能产生良好的细胞免疫应答和体液免疫应答，为一种有效的生物制剂． 关建词鸭痘弱毒疫苗：细胞免疫；体液免疲 鸭瘟(duckplague’DP)又称鸭病毒性肠炎(duckviralenternis，DVE)，是由鸭瘟病毒 (duck pIaguevir∞，DPV)引起的常见于鸭、鹅等雁行目禽类的一种急性、败血性、高度接 触性传染病llJ。其发病率和死亡率都甚高，是水禽养殖业的一大危害l“j。1923年．BaudetHJ 报道荷兰的家鸭暴发了一种急性出血性疾病，Dezeeuw胪J证实了Baudct的发现并再次指出病 毒对鸭的专一性，但他认为该病毒是适应了鸭的鸡瘟病毒。1942年，BosFl对前人的工作进 行了深入的研究，他认为该病不是由鸡瘟病毒引起的，而是鸭的一种新的病毒性疾病，并提 议称其为“鸭瘟(DP)”。1949年，J锄sen和Kunst在第十四届国际兽医学会上建议采用鸭瘟 为法定名称。。1957年，黄引贤”1在我国广州发现并报道了鸭瘟，且研制出鸭瘟组织灭活弱 毒疫苗。我国对DP的预防已有鸡胚化弱毒疫苗pj。现在已见应用PcR、定量PcR等技术 对DP弱毒在体内的动态分布的研究报告II…“．其它大量资料都是对DPv产生的抗体水平 和保护力等进行研究Il“”，本试验通过T淋巴细胞转化实验和应用流式细胞仪对cD3+T淋 巴细胞数量监测来检测DPv引起的细胞免疫应答水平，同时也应用间接ELIsA检测体液免 疫应答水平．进一步阐明了DP弱毒的免疫机理。 l材料与方法 1．1疫苗 鸭瘟弱毒疫苗由中牧股份有限公司提供。鸭瘟强毒株由四川农业大学禽病中心提供。 1．2实验动物及分组处理 28日龄北京鸭，经EusA检测DPv血清抗体阴性，由四川农业大学水禽场提供。实 验鸭10只随机分为2组，每组5只。试验组腿部肌肉注射DP弱毒疫苗200¨L(一个免疫剂量 ，只)，空白对照组注射等量PBs缓冲液。 1．3主要试剂 培养基RPMll640(G1BCOBRL公司)：小牛血清(Hyclone公司产品)：刀豆蛋白A 台盼蓝(sj舯a公司产品)；肝素钠(国药集团化学试剂责任有限公司产品)；FITc标记鼠 9．6， ’为通讯作者 禽类传染病 O．05 7．4PBS+0．05％1、wen20)、封闭液(1％BSA)、 M磷酸盐缓冲液)、洗涤缓冲液(pH 1．4主要仪器 FAcS 流式细胞仪(BD 普通离心机(sIGMA 1．S实验方法 1．5．1血样的采集和处理 免疫DP弱毒苗后第3、7、14、21、28、35、49、63、84、105d颈静脉采血．肝素钠 d颈静脉采血， 抗凝处理用于分离淋巴细胞作淋巴细胞转化试验；第7、14、2l、28、35、49 84、105、126、154、