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酵母细胞催化拆分缩水甘油丁酸酯的工艺研究 邹小明钱俊青·杨兰花匡春兰 (浙江工业大学药学院，杭州．310014) 摘要：从土壤中筛选到一株可选择性拆分消旋缩水甘油丁酸酯的酵母。对最适条件下 发酵所得酵母液开展酯的选择性拆分反应，考察各工艺条件对拆分反应效果的影响。实验结 ％。 关键词：缩水甘油丁酸酯；光学拆分；酵母； 中图分类号：Q556．1 文献识别码：A (R)一缩水甘油丁酸醋是(SL-缩水甘油的前体，后者是一种非常有用的光学活性医药 中间体，用于合成心血管药物、B一阻断剂、L一肉碱、治疗爱滋病的HIV蛋白酶抑制剂、抗 病毒药物及许多具有生物活性的手性内酯和甘油磷脂一…。另外．它还是某些光电材料和功能 高分子材料的重要手性中间体，在农药、液晶、生物探针等领域得到开发利用。3。目前，以 消旋缩水丁酸甘油酯为底物，利用微生物细胞或酶催化选择性水解酯，得到(R)一缩水甘油 丁酸酯的研究国内外开展的较多。川圳，但是以酵母细胞拆分缩水甘油丁酸酯的工作尚未有 报道。从土壤中筛选得到了一株能选择性拆分缩水甘油丁酸酯的酵母菌；未经诱变，研究了 在其最适产酶条件(另文报道)下催化拆分缩水甘油丁酸酯的最优工艺。在最适工艺条件下， 所得的(R)一酯的对映体过量值(ee)达81．4％，转化率为50．5％。 l材料与方法 1．1材料与仪器 Myl0为本实验室从土壤中筛选且经过纯化得到的能够选择性拆分消旋的缩水甘油丁 酸酯一株酵母菌(筛选及鉴定工作另文报道)；缩水甘油丁酸酯为浙江绍兴震元制药股份公 司合成；旋光仪(上海物理光学仪器厂，WZZ．2S型)；高速组织捣碎机(上海标本模型厂， DS-1)；培养基配制为化学纯试剂，其他试剂为分析纯。 1．2实验方法 1．2．1培养基 种子培养基：葡萄糖109，蛋白胨59，KH：P04lg，MgS04．7H200．59，自来水1000ml pH自然 发酵培养基：葡萄糖5．09，麦芽汁1．59，蛋白胨2．59，KH2P040．59，酵母膏1．5， MgS04．7H20 0．259，自来水500ml，pH7．0。 1．2．2培养方法 种子培养：斜面菌种经24h活化后，接种一环至装液30ml的250ml三角瓶中，于28 ℃，200r／min进行摇床培养。 摇瓶发酵：种子培养24h后，以10％的接种量接种于装液60Tnl的500ml的三角瓶中， 于28℃．200r／min进行48h摇床培养。 1．2．3酵母细胞催化拆分缩水甘油丁酸酯的方法 取30ml发酵液，加入0．2mol／L磷酸氢二钠．柠檬酸缓冲液调节pH，再加入0．59的底物， 控制温度，200r／rain振荡反应，得到拆分产物与发酵液的混合液。 瘁誊黧奔：冬瑟小骥≤1980)，男，硬±爨囊生，爨变方巍：生餐铯工。 奄稿件联系人Email：yxy@zjut．edu．㈨ i。2．4酶活的测定耵’ 脂肪酶活力测定用聚乙烯龄橄榄油乳化液方法。酶活力定义：400C．pH7．5下催化水解橄 撬涟，每分钝产生l擞牵尔骚骆羧翁藜量定义鸯i个单整蹲)。本实囊测定该辇母g籍黪酶黪 酶活为1．36u。 1．2．5酯水解率的测定 鼗5．0wA器努蕃熬瀑舍滚爱等耋来袭糕耨嚣爱蓦液为羹熏，震0。IN鹣NaOH避褥渣恚， 根据丁酸的生成量计算水解率。 l，2，6缩水甘油丁酸醮浓度的测定¨1 氯化镁饱和，用移液瞥取1．Oml样品于小烧杯中，撤荡均匀。檬室温下静址反应30min，用 30ml蒸馏水洗涤，搬入2．3滴淡甲酚绿指示裁，用O．1N的NaOH漓定囊兰绿色。随时进行 空塞试验。 i．2．7 (R)，酯的光学纯度的测定 将30ml的三氯譬烧挺入刘嬲余的混会滚中，翠取竞全，离心破魏，过滤得劐滤滚。爨 蕊竞蔹《上海蓊理秃掌仪器厂，WZZ-2S墅)溺定爨滚瓣囊竞囊蕊，求窭蹴麓竞墓【攫X[毡3 端a／cli=2 o dm)；X寸映体过爨值ee(％)=：o【]／[仪]础^([q]址^；一28．40 2实验结祭与讨论 2．1反应蒋系最逶pH靛选择 按实验方法，确窳反应温艘30。C，摇床转速为200r／min，底物添加缀0．59，试验不周 簿条件下群姆缨缒壤他攥分续零甘潼丁黢臻。反应12h磊，溅定酯求解率爱