重组鸡痘病毒vFV282疫苗株细胞免疫水平的研究.pdfVIP

第六次全国会员代表大会暨第11孜学术研讨会 的抗原性(结果见图4略)． ． 3讨论 3．1 02蛋白是ARV外壳蛋白之一，携带有群特异型中和抗原决定簇，与啦蛋白一样能刺激机体产生 保护性的群特异性抗体。啦的通过q作用，提高病毒感染细胞的能力，在ARV的感染和致病作用上有着 重要作用，因此开展对ARV 02蛋白的研究，对深入了解ARV的致病机理有重要意义。 3．2本实验利用RT-PCR方法扩增出完整的ARV 02基因，将其插入到原核表达载体PGEX-4T-1中， 蛋白，经western 所以GST-02或GST 测方法的建立。 3．3通过对广西分离株GSTRI-02蛋白基因的测序及其蛋白的表达，为进一步研究广西分离株与国际 标准株间02蛋白的功能的差异提供参考。为提高以表达产物作为诊断抗原建立的ELISA检测ARC的准确 率奠定了基础。 参考文献略 重组鸡痘病毒vFV282疫苗株细胞免疫水平的研究 夏志平1金宁一l刘艳2季喜娟2 刺种进行二次免疫，通过不同时间阶段脾脏淋巴细胞转化指标分析表明，ConA刺激脾淋巴细胞增殖反应 次免疫后刺种组明显优于肌注组，二次免疫高于一次免疫组。 关键词重组鸡痘病毒肉鸡淋巴细胞转化 胞免疫效果，再次对vFV282活疫苗进行免疫效果观察。 1材料 小牛血清的RPMl640。ConA，5mg／ml的MTT，异丙醇。 培养箱(Et本Sanyo)，DG30022A型酶联免疫检测仪(国营华东电子管厂制造)． 1．3疫苗重组鸡疽病毒vFV282活疫苗，批次：200205，每羽份病毒含量兰10 5。2TCIDeo。 1．4稀释液 纯净蒸馏水。室温下保存不超过l周．用前高压灭菌。 1．5雏鸡购于长春市农科院孵化场。海兰褐蛋雏鸡。 1．5．1适应期适应2日后，对鸡进行分组。 1．5．2进入试验和排除出试验的动物标准在第1次接种前2天，核实鸡的全身身体状况和临床疾病情 家禽传染病 况，选用健康鸡进行分组试验。 1．53饲养本单位实验动物室育雏笼中饲养，100W白炽灯间断性光照，饲养温度平均25C· 1．5．4饲料和饮水常规市售饲料和自来水。 2方法 况详见表l。 2．2免疫接种及采样方法 第一次于7日龄刺种和肌注进行免疫接种，第二次于首免后28天，刺种 非特异性细胞免疫水平，从而分析细胞免疫和比较两种接种途径所产生的免疫效果。采样时间和数量祥见 表1。 2．3淋巴细胞转化实验 。 2．3．1试剂配制 HCI或1mol／LNaOH调pH至7．O一7．2，即完全培养液。 ConA液用RPMLl640培养液配成Img／mL，过滤除菌，在低温冰箱(一20℃)保存。 无Ca2+M92+Hank’s液，用前以3．5％的无菌NaHC03调pH7．2-77．4。配制： NaCI 8．09；KCl0．19；NazHP04．12H20 Mrrr液，将5mgMTT溶于lmLpH7．2PBS中，现配现用。 lmol／LHCl，I临用前配制。 酸性异丙醇溶液96mL异丙醇中加入4mL 2．3．2脾细胞悬液准备 剪碎．经多次洗涤去血液，胰酶消化t5min，经多次洗涤去胰酶，用吸管反复吹打分散细胞，经沉淀去细 2×106个／mL，分装入24孔扳中。42C5％C02培养，加入MTT(40ug／mL)，继续培养4h后， 2．3．3淋巴细胞增殖反应 50ul ConA)，另 将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1mL，--71：3nConA液(相当5ug／mL HCl)，吹 及其沉淀，5000rpm离心，去上