大西洋鳕微卫星引物对太平洋鳕的适用性.pdfVIP

第 29卷第 4期 球 产 科 学 VolI29No．4 201O年 4月 FISHERIES SCIENCE Apr．2010 大西洋鳕微卫星引物对太平洋鳕的适用性 李 丞，刘 芳，姜柏桥，赵 种，冯春 明，姜志强 (大连水产学院农业部海洋水产增养殖学重点开放实验室 ，辽宁 大连 116023) 摘 要 ：利用 Genbank中大西洋鳕 的7对微卫星引物 ，对太平洋鳕基 因组 DNA进行 PCR扩增 。这 7 对 引物均可较稳定地扩增 出条带，它们分别是 Gmo2、Gmo3、Gmo8、Gmo19、Gmo35、Gmo36、Gmo37，并 且扩增出的7个位点均表现出多态性，共获得 69个等位基因，每个位点的等位基因数 目为4～17。大小 为 ll1～227bp。在 7个位点上 2种鱼的等位基因的大小存在着不同程度的差异。其中Gmo37在大 西洋鳕和太平洋鳕中扩增 出的条带的长度差异最大，基本无重合部分，分别为 220～290bp和 144～ 226bp，本研究结果 以期对 2种鳕科鱼类遗传结构的进一步研究提供帮助 。 关键词 ：大西洋鳕 ，太平洋鳕 ，微卫星 ，适用性 中图分类号 ：$968．9 文献标识码 ：A 文章编号 ：1003—1111(2010)04-0217-04 太平洋鳕 (Gadus 口cr0c￡p^nzs)又名大头 1 材料与方法 鳕 ，属鳕形 目，与大西洋鳕 (G．morhua)亲缘关系很 近，不 同的分类 系统都将两者 同列为鳕科 、鳕属。 1．1 样 品的采集和处理 3O尾太平洋鳕购 自大连龙王塘渔港 ，取肌 肉约 仅用鳍条数、鳃耙数和脊椎骨数不能将两者分开， 需要加上体色等其他特征或 比较、解剖进行其分类 3g于 95 乙醇中一20℃保存 ，1d后将 95 乙醇 学研究L1]。 更换为 70 乙醇 ，3d后用 7O 乙醇再更换 1次。 1．2 引物 微卫星 DNA (MicrosatelliteDNA)又称单一 的序列重复 (SimpleSequenceRepeat，SSR)，由 1 从 GenBank上查找获得大西洋鳕 的引物 ，分 ～ 别 为 Gmo2、Gmo3、Gmob、Gmol9、Gmo35、 6个碱基对的核心序列 串联重复而成 ，其位点数 Gmo36、Gmo37(表 1)。 目巨大并随机分布于整个基 因组中，具有丰富的长 度多态性信息且按孟德尔方式遗传 。它是基于基 表 1 试验的微 卫星引物序 列及重复序列[s] 因组 DNA水平 的差异进行检测 ，不受组织 、器官种 类、环境条件等因素影响，因此是水生动物种质鉴 定 、亲缘关系及种质分类等研究的理想标记E引。 微卫星 DNA标记的困难在于引物的获得 。常 获得微卫星位点的常用方法包括 ：从公共数据库 中 查找和从基因组 DNA 中分离 [3]。对于大多数物种 而言 ，多采用后者 。而后者必须构建基 因组文库 ， 费用高、时间长且效率低 ，限制 了微卫星分子标记 技术的应用和发展 ]。 笔者利用 GenBank中7对大西洋鳕 的微卫星 引物对大西洋鳕进行 PCR扩增 ，检测 了合适的微 卫星引物 ，同时对大连海域群体 的遗传多样性进行 l_3 基因组 DNA 的提取 了初步分析，以期对鳕科鱼类分子遗传和进化方面