微生物检测-第6章4.pptVIP

第四节 梭菌（Clostridium）检查法;梭状芽孢杆菌病;（一）梭菌形态特征Morphological properties;（二）培养特性 cultural properties;（三）检查方法 Test method;;;;2. 消除杂菌干扰;3.形态学检查;二、产气荚膜梭菌（C. perfringens）;（一）生物学特性;2. 培养特性;;3.生化反应;4. 致病性;(二)产气荚膜梭菌半定量测定;（三）特征性生化试验;2.石蕊牛乳试验 Litmus Milk Reactions ;3.乳糖分解-明胶液化试验;4. 卵磷脂酶试验与奈格尔（Nagler）试验;方法：将卵黄平板分成两半，其中一半涂上产气荚膜梭菌抗血清，37℃待干后，将待检菌轻轻在平板上划线，由不涂抗血清的一半划向涂过抗血清的一半，在厌氧条件下37℃培养24-48h，观察结果。;结果： 在接种待检菌未涂抗血清的一侧，菌落周围有不透明区，表示卵磷脂酶试验阳性。 涂抗血清的一侧，菌落周围无不透明区，表示卵磷脂酶活性已为其特异的抗血清中和，为奈格尔试验阳性。 如两侧菌落均无不透明区，为卵磷脂酶试验阴性。 问题：抗血清不易获得;;检样25g+营养肉汤;破伤风梭菌是人类破伤风的病原菌。 大量存在于人和动物的肠道，由粪便污染土壤。 侵入伤口生长繁殖，释放外毒素，引起痉挛性抽搐，导致窒息或呼吸衰竭死亡。 发展中国家，新生儿破伤风死亡率90%。 用于深部组织、创伤、溃疡的制剂不得检出 ;1. 形态与染色 Morphology and stain 菌体细长，0.5μm ×(2-5)μm，直杆菌，无荚膜，周生鞭毛；芽孢球形、端生成鼓槌状，是显微鉴别的重要特征。 G+，但在芽孢形成后，易转变成阴性;2.培养特性 Culture characteristics 专性厌氧；生长最适温度37℃，45℃不生长；最适pH7.3-7.6 在血琼脂平板上，呈扩散生长，不易获得单个表面菌落；37℃培养48h，菌落直径2-4mm，扁平、半透明、灰白色，边缘不齐，周边疏松呈羽毛状，有狭窄的β溶血环 在庖肉培养基中，肉汤轻度混浊，碎肉消化，发黑恶臭;厌氧小瓶和注射器 非营养型运送培养基 阻止氧气扩散 维持生存72h 含指示剂系统，有氧时变为淡紫色;3.生化反应 biochemical reaction ;4. 抵抗力 Resistance;5. 抗原构造 antigenic structure ;（二）致病性与免疫性 Pathogenic and immunity ;2. 所致疾病Disease caused by C. tetani ;3. 免疫性 immunity ;（三）检验方法 Test method;;2.革兰染色镜检 Gram stain and microscopy ;3.毒力试验 virulence test ;;;4.分离培养 isolate and culture ;5.结果判定 result and analysis;（四）注意事项 note;供试品 ;其它方法;;四、 肉毒梭菌（C. botulinum）;;4 ×1 μm的大杆菌 4-8根周生鞭毛，运动迟缓 无荚膜 适宜温度25-35℃ 适宜pH为6.0-8.2 菌落3mm，半透明，表面颗粒状，边缘不整齐，界限不明显，向外扩散，呈绒毛网状;（二）致病性 pathogenic;肉毒毒素是一种神经毒素，阻止向胞外分泌和释放乙酰胆碱。导致无法应答运动神经元的冲动，肌肉不能收缩，松弛麻痹。;2.所致疾病 Disease caused by C. botulinum ;婴儿肉毒病 感染性食物中毒。一岁以内特别是半岁以内的婴儿，肉毒梭菌在肠道内繁殖并产生毒素，毒素经肠道吸收而致病。 大多在1-3个月内自然恢复，病死率不高。 美国每年有约100例婴儿肉毒中毒，蜂蜜和灰尘。 表现为便秘、无精打采的、大多虚弱、仅是很少。常常死于呼吸衰竭。;三种梭菌的比较;;（二）肉毒梭菌检验;分离培养;接种卵黄琼脂平板，分成2份，分别在35℃的需氧和厌氧条件下培养48h 肉毒梭菌只有在厌氧条件下才能在卵黄琼脂平板上生长并形成特??菌落，在需氧条件下不生长;检样;检样制备;毒素检出;确证试验;毒力测定;定型试验;（四）注意事项