基于脾虚证相关基因功能鉴定的小肠上皮细胞RNA干扰转染条件研究.pdfVIP

2000 160 【结论】 Lipofectamine nmol／L组转染效率最高(平均76．3％)，而空白对照组约为1％。 1．0斗L+FAM—siRNA 160 2000 FAM—siRNA nmol／L(20 mL)+Lipofectamine 1．Lmol／L、4．8斗L，终体积为O．6 时转染效率最高的转染条件。 关键词：基因功能； RNA干扰； 细胞培养 中图分类号：R241．6文献标识码：A RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是真核 o研究建 生物中普遍存在的一种自然现象，是由双链RNA 立的，其来源于新生的正常大鼠小肠，在组织学和 stranded (double RNA，dsRNA)启动序列特异的转 免疫学方面具有隐窝样上皮细胞的特征，为未分化 录后基因沉默过程，是生物体在进化中形成的一种 的上皮干细胞，无特异性基因表达及无致瘤性。目 内在基因表达的调控机制。Fire等u1首次在线虫中 发现RNAi现象，后来大量的研究表明，RNAi广 泛存在于真菌、植物和动物中，由此人们认识到 统疾病的体外相关研究∞一7|。为在该细胞上开展 RNAi技 研究基因功能的一种有力的革命性 第6期 王静，等．基于脾虚证相关基因功能鉴定的小肠上皮细胞RNA干扰转染条件研究 599 Amresco产品，乙二胺四乙酸二钠(EDTA2Na· 和3分之问，有较强荧光表达但不集中或者有微弱 0，分子量372．24)由广州威佳科技有限公司 2H2 16页)。 荧光表达但较密集(图1，见彩图页第6 提供，Albumin及Bovine为Genebase产品，牛胰岛 15一FAM经9人次评分后计算平均分值并作数据统计，进行 素(insulin)为Sigma产品，Ncontrol一058 8151 秩和检验o (No．200522174)购自广州市瑞博生物科技有 1．7 流式细胞仪检测转染效率 根据荧光显微镜 2000(Cat．No． 限公司，转染试剂LipofectaminelM 1 h 成像评分结果设置不同组别，每组3个复孔。24 1985—062)均由 1668—027)、Opti—MEM(Cat．No．3 1型相差荧光倒置显微镜 Invitrogen公司提供。IX-7 O．5mL消化液，孵育2 EPICS型流式细胞仪 为Olypums公司产品，ALTRA 为贝克曼尔特实验系统(苏州)有限公司广州分 nm，发 公司产品。