蓝白斑筛选法.pptVIP

实验十五 重组子的筛选技术 －－蓝白斑筛选法;【实验目的】 学习蓝白斑法筛选重组菌落的原理及具体的实验操作过程。 【实验材料】 移液器及吸咀 培养皿 接种环 1.5mL离心管 恒温培养箱 水浴锅 ?LB液体培养基 蛋白胨 8g 氯化钠 7g 酵母 5g 定容至1000mL，用NaOH调pH至7.5~7.6，可置-20℃保存， 高压灭菌;?LB固体培养基 液体培养基中加入1.5%的琼脂，15磅30分钟高压灭菌后使用 ?X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-?-D-半乳糖) X-gal溶于N, N’-二甲基甲酰胺中配20mg/mL原夜，-20℃避光 保存 ?IPTG(异丙基-?-D-半乳糖苷) 0.2g/mL分装，贮存于-20℃ ?氨苄青霉素(Ampicillin) 1g Ampicillin溶于5mL灭菌水中，配成母液，保存于-20℃ ?转化菌;【实验原理】 β-半乳糖苷酶是一种把乳糖分解成葡萄糖和半乳糖的酶，最 常用的β-半乳糖苷酶基因来自大肠杆菌lac操纵子，它们使载体 中带有大肠杆菌lac操纵子的调节序列和编码β-半乳糖