枯草芽孢杆菌apr基因表达载体的构建.pdfVIP

第22卷 第2期 黑 龙 江 八 一 农 垦 大 学 学 报 22(2)：8587 2010在 4月 JournalofHeilongjiangBayiAgriculturalUniversity Apr．2010 文章编号：1002—2090(2010)02—0085—03 枯草芽孢杆菌apr基因表达载体的构建 邱旺，张东杰 (黑龙江八一农垦大学食品学院，大庆 163319) 摘 要：利用PCR技术和基因重组技术构建了枯草芽孢杆菌蛋白酶基因一apr的重组表达质粒 PET一22ba／pr，并将其转人大肠 杆菌(E．coli)BIJ21中，经蓝白斑筛选获得 apr的表达载体 PCR后经琼脂糖凝胶电泳结果显示，在约 1．5kb位置有特异性条带 ， 与预期的枯草芽孢杆菌蛋 白酶基因大小一致。重组质粒 pGM—T／apr经双酶切后获得约 1509bp的apr基因片段，同预期结果 相一致，测序结果同GeneBank中的序列同源性达到 100％。未发生任何突变。表明重组质粒pET一22b／apr构建成功。 关键词：枯草芽孢杆菌；蛋白酶；表达载体 中图分类号：Q78 文献标识码 ：A ConstructionofExpressionVectorforBacillussubtilisapr QiuWang，ZhangDongjie (CollegeofFoodstuff，HeilongjiangBayiAgriculturalUniversity，Daqing163319) Abstract：Inthiswork，expressionplasmidsPET一22 b／aprwereconstructedbymeansofPCR andrecombinantDNA techniques． ExpressionVectorofaprinE，coilBL21wasperformedbyinductionofIPTG．Anspecificbandabout1．5 kbwasvisiblein the resultofagarose gelelectrophoresis，which wasconsistentwith expected size ofaprE． A 1 509 bp fragmentof aprgene RecombinantPlasmidwasobtainedbydigestingpGM—T ／aprwithKpnIandBamHI．Thesequenceoftheclonedaprwasconfirmed tobecorrectbysequencehomologyanalysis，accountingfor100％．Thegenebyclonedwithoutmutationsinsequence．Theplasmid pET一22b／aprisconsturctedsuccessfully． Keywords：Bacillussubtilis；apr；expressionvector 蛋 白酶是催化肽键水解 的一类酶，因肽类为小 肃省盐碱地土样中筛选到一株耐热碱性蛋 白酶产生 分子物质易吸收，具有抗氧化 、延缓机体衰老、调节 菌菌株GXD9902。陈向东 等对一株地衣芽孢杆菌高 机体免疫等生理功能，所以蛋白酶的生产决定了肽 产菌株 C6进行诱变处理后，获得了一株产碱性蛋 白 类现已被广泛应用到各个领域，尤其是发酵领域。据 酶活性 比出发菌株高 1．9倍的菌株 ，产量可达到 估计当前世界工业生产酶市值 10亿美元，其中75％ 19000U·mL～。刘新育4J【等用PCR的方法从枯草芽 为水解酶类，蛋 白酶为工业生产酶三大类之一，其市 孢杆菌 A一109中扩增出的碱性蛋 白酶基因片段含