脑脊液来源人类免疫缺陷病毒tat真核表达载体的构建及鉴定.pdfVIP

北京 医学 2014 年第 36 卷第 6 期 ·433 · 论著 · · 脑脊液来源人类免疫缺陷病毒 tat 真核表达载体 的构建及鉴定 刘利锋 乔录新 李庆 李莉 李威 吴昊 陈德喜 【摘 要 】 目的 探讨脑脊液来源人类免疫缺陷病毒 （HIV ）tat 真核表达载体的构建 ，并 研究 TAT 蛋白在真核细胞 的表达 。 方法 从脑脊液中扩增出 HIV tat 基 因 ，构建 pcDNA-tat 真核表达载体 ，所构建载体经酶切和测序鉴定 。将构 建的表达载体转染 293T 细胞系 ，通过免疫荧 光检测 TAT 蛋 白的表达。 结果 成 功扩增 tat 基 因 ，酶切和测序 结果证 实正确构建了表达载体 pcDNA-tat ，免疫荧 光证 实所构建载体能在 293T 细胞中 有效表达 HIV TAT 目的蛋白 。 结论 成 功构建真核表达载体 pcDNA-tat ，为 了解 HIV 在中枢神经系统的潜伏机制奠定实验基础 。 【关键词 】 脑脊液 人类免疫缺陷病毒 tat 基 因 载体构建 鉴定 Construction and in vitro expression of an eukaryotic vector encoding HIV tat from cerebrospinal fluid samples Liu Lifeng, Qiao Luxin, Li Qing, Li Li, Li Wei, Wu Hao, Chen Dexi. Center for Infectious Diseases, Beijing Youan Hospital, Capital Medical University, Beijing 100069, China ： ， ： Corresponding author Chen Dexi Email dexi09@ 【Abstract 】 Objective To construct an eukaryotic plasmid which contains HIV -1 tat from cerebrospinal fluid samples, and to study the TAT protein expression in the eukaryotic cell in vitro. Methods HIV-1 tat gene was amplified from cerebrospinal fluid samples by PCR. The tat gene was inserted into the eukaryotic plasmid pcDNA3.1, and the resultant recombinant plasmid was confirmed by restriction endo -nuclease and sequencing. The pcDNA3.1 -tat was transfected into 293 T cell, and the expression of TAT protein was analyzed by immunoflu