质粒型甲病毒复制子载体系统的构建及其功能鉴定.pdfVIP

233 主堡塞墼塑堕压堑查堂盘查!!!!至!旦篁!!鲞箜!塑!!!!!!!!垦婴垦!!!!!望!：!!!!!!!!：!!!：!!：堕!：! ．技术方法． 质粒型甲病毒复制子载体系统的构建 及其功能鉴定 张凤娟，唐丽，尉研，王焕琴，杨蕴芝，吴萌，张鹏，梁国栋，朱武洋 【摘要】 目的构建质粒型甲病毒复制子载体系统，并对其功能进行鉴定。方法 在XJ一160 病毒感染性cDNA克隆的基础上，将病毒非结构基因序列分为三个片段扩增，分步克隆至真核表达载 体pVAXlCMV启动子下游，并用多克隆位点序列替代病毒的结构基因构建XJ一160病毒质粒型复制 CMV启动子下游构建载体的两个 子载体。将病毒核蛋白基因及包膜糖蛋白基因分别克隆至pVAXl 辅助质粒。通过绿色荧光蛋白报告基因及海肾荧光素酶报告基因的表达检验该质粒型载体系统的 功能特性。结果 成功构建了包括复制子载体和辅助质粒的质粒型甲病毒复制子载体系统，且该复 制子载体系统可成功表达绿色荧光蛋白报告基因及海肾荧光素酶报告基因。结论 本研究构建了 能够表达外源基因的质粒型甲病毒复制子载体系统，为目标基因表达、重组病毒颗粒制备等奠定了 基础。 【主题词】Sindbis病毒；复制子；基因 Constructionandidentificationof vector derivedfrom plasmid-basedreplicon system Alphavirus ZhangFengjuan‘，TangLi，WeiYah，Wang Yunzhi，Wu Huanqin，Yang Meng，ZhangPeng，Liang Chemical Guodong，ZhuWuyang．‘CollegeofLifeScienceTechnology，Beijing Universityof Technology， 曰e咖ng100029，China Correspondingauthor：ZhangPeng，Email：zhangpeng@mail．buct．edu．cn；ZHUWuyang，Email： 1@sina．con zhuwuyan9197 Toconstructa vector derivedfrom objective 【Abstract】 plasmid—basedreplicon system itsfunctionswereidentified．Methodsbasedon viralinfectiouscDNA Alphavirus，and XJ-160 clone，the virus non—structural werederidedintothree to andthenclonedintothe genesequence fragmentsamplify vector downstreamclone．A site eukaryoticexpressionpVAX!CMVpromoter bystep multiplecloning thevirusstructural vector sequencereplacing gene．plasmid—basedreplicon derivedfromXJ·160vir