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降落和重叠延伸PCR构建靶向肿瘤干细胞腺病毒载体及感染实验.pdf
2011；3l(9) 南方医科大学学报(JSouthMedUniv) ·1513·
·基础研究·
降落和重叠延伸PCR构建靶向肿瘤干细胞腺病毒载体及感染
实验
张超1，刘国炳2，田平阁1，周春平1，李学农1
南方医科大学1病理学系／广东省分子肿瘤病理学重点实验室，2南方医院妇产科，广东广州510515
摘要：目的应用降落和重叠延伸PCR法构建对肿瘤干细胞有特异靶向性的高效载体．复制缺陷型腺病毒载体。观察其对
CDl33+人大肠癌细胞株SW480的感染效率。方法利用重叠延伸PCR技术扩增5型腺病毒纤毛球端HI环两端的基因序
性酶切位点。在此基础上，用降落PCR克隆纤毛基因全长编码区序列，构建出腺病毒穿梭质粒pNEB．F5。利用凝胶图像
coli
BJ5183中同源萤组，得腺病毒载体
分析和基因测序验证所构建质粒的正确性。再与pAdEasy．1，pShuttle．GFP在E
感染效率。结果降落PCR和重叠延伸PCR都扩增出特异性条带，测序结果与预期相符。与Ad5．GFP相比，
细胞的腺病毒载体，利用降落和重叠延伸PCR成功构建新型靶向肿瘤干细胞的腺病毒载体，其对CDl33+人大肠癌细胞株
SW480实验显示AdSFHI．GFP组感染效率明显强于Ad5．GFP组。
关键词：降落PCR；重叠延伸PCR；}J中瘤干细胞；复制缺陷型腺病毒；穿梭质粒
中图分类号：R363文献标志码：A 文章编号：1673-4254(2011)09．1513．05
TouchdownPCRand extensionPCRfor CDl33+cancerstem
overlap generateing
cell．selectiveadenovirUSvector
ZHANG
Cha01，LIU
Guo-bin92,TIANPing-geI,ZHOUChun-pin91，LIXue-non91
Tumor and
o／Pathology／KeyLaboratoryo／Molecule o／GuangdongProvince2,Department
Department Pathology o／Gynecology
Medical
510515,China
Obstetrics,NanfangHospital,SouthernUniversity,Guangzhou
ToconsflXlcta adenovirUSvector cancerstemcellsmodified
Abstract：Objectivereplication-incompetenttargeting by
its in in
touchdownPCRand extensionPCRand infection CDl33+SW480cellsvitro．
overlap investigate effidency
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