猪精液冷冻保存技术研讨.pdfVIP

猪精液冷冻保存技术的研究 指导教师:李 青 旺 教授 研 究生 :江 中 良 摘 要 采用手握法采集成年大约克种公猪精液，收集中段富含精子部分，配制不同的稀释液，在不同条件 下进行冻前预处理，再用不同的解冻液和解冻方法进行解冻，然后进行人工授精试验:同时，还对冷冻 前后精液中细菌含最与种类和低温保存猪精液进行了研究。结果如下: 1.在使用的7种稀释液中，5,6号稀释液优干其它5种 (P0.05)，其冻后活率分别达0.46,0.50 (0.5ml颗粒)和0.40,0.49(0.5ml细管)，精子复苏率分别是76.7%,74.6%(0.5ml颗粒)和70,5%, 78.3%(O.5ml细管)，且两者差异不显著Mo.05):同种稀释液之间，颗粒与细管冻精的差异不显著 (PO.05)。以颗粒冻精按不同的始冻温度、平衡温度、入氮温度制定了始冻温度与冻后活率的关系曲线 和冷冻温度曲线。 2对新鲜精液在离心前静置不同时间，选择不同的离心速度，离心时间及不同的精清留量等进行冷 冻前预处理。结果表明:离心前在37℃环境下静置60min，其冻后效果(0.5ml细管精液冻后活率达0.50, 复苏率75.8%,颗粒精液0.5ml冻后活率0.48,复苏率72.5%,0.lml活率0.47，复苏率70.6%)优于30min 和90min(P6.05);离心过程以10OOr/min的速度离心10min较好 (0.5m1细管精液冻后活率。48,复 苏率76.8%,0.5m1颗粒精液冻后活率0.46，复苏率73.5%,O.lml颗粒冻后活率0.44,复苏率69.4%), 优于500r/min和1500r/min分别离心7min和13min(P0.05);精清留量以精清/精液(体积比)等于1/1 时较好，优于1/2和0/1(POA5)e 3对五种不同的冷冻保护剂(甘油、DMSO、乙二醇,Tris,OEP)和五种自行设计的解冻液配方以及 解冻方法进行对比.结果表明:甘油为最佳的冷冻保护剂 (P(0.05)，其最适宜浓度为3%(PO.05)， 冻后活率最高可达0.48;不同冷冻保护剂对精子的毒性大小依次为:乙二醇DMSOOEPTris甘油;4 号解冻液和精清的解冻效果明显好于其它三种解冻液 (P0.05)，而两者之间无明显差异 (P0.05)，但 以4号解冻液在冻后活率方面稍高于精清;解冻方法以在75℃下，4s解冻效果较好 (活率0.47,顶体 完整率55.6%，精子畸形率18.32%) 4.采用自制冷冻稀释液和解冻液配方，对自制的颗粒冻精和细管冻精进行人工授精试验。结果表明: 在有效存活时间和冻后活率上，颗粒冻精与细管冻精之间差异不明显 P〔0.05);而颗粒冻精的受胎率和 窝均产仔数要好于细管冻精，分别为颗粒冻精:81.81%,85.71%,9.22和9.33头，细管冻精75.00%, 80.00%,8.17和8.25头。 5.原精中细菌菌落数量平均为1.5x1扩个/ml，平衡后精液中细菌菌落数量平均为1.1x1了个/ml; 颗粒冷冻精液中:0.Iml含细菌菌落数920个，0.5ml中有3750个;细管冷冻精液中:0.25m1细管含细 菌菌落数量1060个，0.5m1细管含细菌菌落数1520个。细菌经培养、染色后镜检，从外形上初步确定有 葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌等。 6.用5种不同的低温保存稀释液按不同比例稀释，在00C-5℃的低温环境下保存。结果表明:2号 稀释液的有效保存时间达6014.05h，与其它四种稀释液比较，差异极显著(P0.01)，猪精液低温保存离 心速度以1000r/min的离心效果较好，有效保存时间达50士168h(P0.05)，同种稀释液不同比例稀释 精液与稀释液按1:1的比例稀释，效果较好 (P0.05). 关键词:猪，冷冻精液，精子活率，复苏率，细菌含量，低温保存 StudyofFreezing-PreservationTechnologyonBoarSemen :ProfessorLiQingWang Student:JiangZhongLiang