猪圆环病毒2型DNA疫苗对小鼠的免疫反应及壳聚糖、脂质体等佐剂对免疫效果的影响研究.pdfVIP

疾病控制 猪圆环病毒2型DNA疫苗对小鼠的免疫反应 及壳聚糖，脂质体等佐剂对免疫效果的影响拳 张洪利1·2丛丽媛1·3王建龙1·3孙丽华1·4马红艳1 高向阳2蒋智勇1’4王浩文1刘燕玲1宋长绪1¨ (1．广东省农科院兽医研究所，广东广州510640；2．华南农业大学。广东广州510640； 3．内蒙古农业大学，内蒙古呼和浩特0100183；4．西北农林科技大学。陕西杨凌712100) 摘要分别用PCV2 DNA疫苗，PCV2 ORF2的重组质粒pAdTrack-ORF2ORFl加ORF2的重组质粒 pAdTrack-ORFl+2DNA疫苗，壳聚糖佐剂包被的pAdTrack-ORF2DNA疫苗，壳聚糖佐剂包被的 pAdTrack-ORFl+2DNA疫苗，以及脂质体佐剂包被的pAdTrack-ORF2DNA疫苗、脂质体佐剂包被的 pAdTrack—ORFI+2DNA疫苗注射免疫小鼠肌肉，每隔14d免疫一次，连续3次。第3次注射后14d，DNA 疫苗免疫组中小鼠血清中的PCV2ORF2特异性抗体达到最高，佐剂包被的DNA疫苗产生抗体更持久。 与对照组相比，DNA疫苗免疫组小鼠脾细胞对丝裂原刀豆蛋白A(ConA)的刺激反应显著增强，NK非 特异性杀伤活性均明显提高。pAdTrack-ORF2与pAdTrack-ORFl+2DNA疫苗的免疫效果没有显著性差异。 含有佐剂包被的DNA疫苗诱导小鼠脾脏淋巴细胞的增殖能力、NK非特异性杀伤活性高于没有包被的 DNA疫苗。脂质体佐剂包被的DNA疫苗在诱导小鼠脾脏淋巴细胞NK非特异性杀伤活性方面显著优于壳 聚糖包被的DNA疫苗。三色流式细胞术分析免疫小鼠脾脏淋巴细胞中各细胞亚群的比例，表明DNA疫 苗pAdTrack-ORP2和pAdTrack-ORFl+2DNA疫苗免疫可以引起小鼠脾脏淋巴细胞中1h 果更为显著，两种佐剂之间没有显著差异。因此。试验表明DNA疫苗pAdTrack-ORl砣和 脾淋巴细胞增殖反应加强以及脾脏淋巴细胞T细胞亚群增加，壳聚糖和脂质体作为佐剂可以提高免疫效 果。 关键词PCV2DNA疫苗小鼠免疫效价脂质体壳聚糖 断奶猪多系统衰竭综合征(Postweaningpigsmulfisystemicwasting 大学者于1991年发现，随后美国、西班牙、加拿大及欧洲国家等也相继从病料中分离到猪圆环病毒 等，200l；Harms等，2001o给世界养殖业造成了巨大的经济损失。 PCV2是一种很稳定的病毒而且能在感染猪群长期存在，根除这种病毒十分困难。为了控制这 种病毒，免疫预防显得十分重要。一般疫苗研发主要是灭活苗和减毒活疫苗两种，灭活苗成本高， 减毒活疫苗具有返祖的可能。而且PCV2生物学特性比较特殊，它在细胞上增殖滴度很低，而且不 因的杆状病毒表达产物免疫猪，可使猪产生对PCV2的抵抗力。但这类基因工程苗表达、分离、纯 化得到满意的蛋白十分困难，而且费时费力，费用高昂，所以研究还仅仅停留在实验室阶段。DNA 疫苗在细菌、病毒、寄生虫等疾病以及肿瘤和过敏反应的防治中显示出巨大潜力，被视为认为是继 减毒灭活疫苗和亚单位疫苗之后的第三次疫苗革命。DNA疫苗已经应用在猪的免疫，不同抗原的 省自然基金031990)o 作者简介：张洪利(1972．)，男，硕士，主要从事生物化学、分子生物学和免疫学研究。 ·嗵讯作者：宋长绪，E-mail：cxson92004@163．com。cxsong@yahoo．com。 365 中国畜牧兽医学会养猪学分会论文集 特异性抗体。金宁一等(2005)构建了pVAXI-ORF2 关于PCV2DNA疫苗的研究，目前主要集中在基于ORFR基因的新型疫苗研究上。本实验室分 PCV2的DNA疫苗。DNA疫苗最为有效的给药途径是肌肉注射。但一些临床试验结果表明裸DNA 疫苗存在着给药剂量偏大，生物利用度低，体内持续存在的时间不够长等缺点。佐剂是最重要的影 载体构建pAdTrack-ORF2、pAdTrack-ORFl+2 裸DNA疫苗以及脂质体和壳聚糖不同佐剂包被的DNA疫苗进行免疫小鼠，采用E