水稻不同状态种子外植体的培养表现研究.pdfVIP

按 耍 水稻不同状态种子外植体的培养表现 赶研 (华南农止大学生命科学李比，广州，510642) 摘要 生物技术尤其是遗传工程的应用为水稻品种的定向改良开辟了新的 途径。近年来。国内外大量的人力物力的投入使遗传工程的研究取得了长足 的进展并开始在实际应用中取得令人鼓舞的成就。但是，目前采用遗传工程 技术改良水稻的工作效率还很低，这其中，除了导入的外源基因在遗传上的 不稳定 (基因丢失)或不表达 (基因沉默)等与转化技术的不完美和对植物 的遗传机制的不了解外，缺乏高效的转化细胞克隆植株再生培养技术也是一 个显著突出的问题。 大量的研究表明，影响水稻离体培养植株再生频率的主要因素是材料的 基因型、外植体状态和培养基中的外源激素。其中，对于己有具体目的的遗 传工程育种来说，材料的基因型基本是确定的，没有改变的余地，而对培养 基的激素研究方面国内外的科技工作者己经进行了长期的大量研究工作，奠 定了较好的基础。本文将从研究得较少的外植体状态方面着手，希望通过实 验探讨提高水稻组织培养植株再生频率的最佳方法。 研究以粳釉93，奇妙香，溪野占，秋桂矮11和台北309等5个水稻品 种为实验对象。研究内容包括比较不同成熟度的新鲜种子和干燥种子材料外 植体以及在花期经过激素处理的种子材料外植体在愈伤组织诱导率、形成的 愈伤组织在量和质上的差别。实验分早造和晚造两个部分分别进行，实验的 方法基本一致。实验过程中，通过在始花后不同天数取穗，获得成熟度不同 的种子外植体材料;部分材料在取材后马上进行培养，另一部分材料则在取 材后放置于干燥皿中进行干燥保存。千燥保存的材料在2个月后进行培养。 按 县 激素处理以品种奇妙香植株新抽稻穗为材料，在始花后第3天用浓度均为 5mg/I的2,4-D.ABA,KT和GA的激素处理以改变种子材料的生理状态。 实验结果表明，种子外植体的成熟度对离体培养效果的影响非常明显。 成熟度低的外植体的愈伤组织诱导率较低，产生的愈伤组织的重量也较小， 但是愈伤组织的状态较好，具有高的植株再生能力的胚性愈伤组织所占的比 例明显较大。在继代培养过程中，成熟度低的种子外植体具有高的胚性愈伤 组织生长速度:在植株再生的预分化培养过程中，来自成熟度低的种子外植 体的愈伤组织更容易产生绿点和绿芽，最终能够得到更多的健壮植株。这种 状况在5个供试品种的早、晚造材料中的培养中大体相同。 新鲜和干操的外植体在培养中的表现，在早造材料和晚造材料上有所差 异。早造干燥种子外植体的培养特性以及植株再生情况明显优于新鲜种子外 植体的.早造成熟度低的干燥种子与成熟度相同的新鲜种子相比较，具有高 的诱导率，以及高的愈伤组织重t,受成熟度的影响较小，而且愈伤组织的 状态也较好.在愈伤组织的继代培养过程中，成熟度低的干燥种子同新鲜种 子一样，具有高的胚性愈伤组织It,高的胚性愈伤组织生长速度和高的植株 再生效率 (再生植株数童/单位愈伤组织重t).和早造比较，在晚造的品种 间的差别相对明显。例如，粳釉93,秋桂矮 11，台北309三个品种的新鲜 种子外植体的培养表现优于干燥种子外植体。 花期激素处理对种子外植体的培养表现产生了显著影响，主要体现在胚 性愈伤组织的增殖率普遍得到了提高。在4种激素中以GA处理的效果最好， KT其次，ABA次之，2,4-D处理最差.因为G人处理能够显著改善外植体的 培养表现，因此，在实际工作中具有应用价值。 关键词:水稻，外植体，激素，生理状态，愈伤组织，植株再生 一 月 词 位 释 缩写词注释 缩写词 英文原文 中文 2,4-D 2,4Dichlorophenoxyaceticacid 2,4一二氛苯氧乙酸 K T Kinetin 激动素 A B A Abscisicacid