解析基因工程流程图研究.pdfVIP

解析基因工程流程图 玉芳刘汝根王洪英 山东省淄博市淄川区园林管理处 255i00 摘要：基因工程是一种外科手术式的遗传操纵，是按照预先设计的工程流程图，借助于实验室的技术，将某种生物 的基因或基因组转移到另一种生物中去，使后者定向地获得新的遗传性状，成为新的类型．基因工程的操作步骤：分离目的 基因i与载体分子连接；转化与增殖：受体细胞的克隆与增殖；提取已扩增的目的基因：连接到表达载体上；导入宿主细 胞并实现功能表达． 关键词：基因工程流程图 党的。十六”大规划了我国未来20年全面建设小康社会的宏伟蓝图，其中特别提出了通过走“科技含量高、经济效益 好、资源消耗低、环境污染少、人力资源优势得到充分发挥”的新型工业化道路来实现经济总量翻两番的发展目标。这完 全符合当今国际社会实施可持续发展战略的新方向．人们自从认识了遗传基因后，就可以运用DNA重组技术改造和创建新 的生物品种，也可以利用转基因工程，把某种生物的基因转到其它生物体的细胞中，使其成为具有他和它种基因的生物， 这样，就可以利用它有利的方面为人类造福． 基因工程有三大优点：一是使人、动物、植物、微生物之问基因相互交换；二是可以快速培育新的品种；三是可以使生 物定向变异．基因工程的研究与应用。将为解决农业、工业、医学等部门所面临的许多重大问题开辟新的途径． 一般来说，进行基因工程首先需要一个施工的设计蓝图，然后才能进行施工的操作．基因工程的施工流程图大致分为3 个步骤： 1．为旆工准备材料：分离或合成目的基因、寻找载体和工具酶 1．1目的基因的分离或合成 (1)在体外用化学合成或化学合成结合酶促台成取得所需目的基因，为此，必须事先知道目的基因或mRNA或相应蛋 白质的一级结构，即核苷酸或氨基酸的顺序。以单核苷酸为原料先合成许多寡核苷酸小片段(约8—15个核苷酸长)，各片 段间部分碱基配对，取得DNA短片·以后再经过DNA连接酶的作用，将一些短片依次连接成一个完整的基因链．通过克隆 构建合成基因文库． (2)从生物的基因组中分离基因是采用限制性核酸内切酶，把组织的全部染色体DNA切割成许多小段，并分别与载体 重组·转入到大肠杆菌中，如此形成的转化细胞群舍有各种染色体DNA片段．繁殖其中的某一转化细胞即可增殖相应的DNA 片段，分离出纯一的目的基因．这种分离某一特定基因片段的方法常称“鸟枪射击法”．运用此法还可以构建基因文库或基 因组文库． (3)酶促成基因：选择特异而高度分化的组织器官，在这些组织的细胞中提取纯化ⅢRN^．以mRNA为模板，用逆转录 转录完成的产物是长短不一的双股DNA分子群，还需要应用凝胶电泳分离纯化出避长的双股DNA．通过逆转录酶促方法合成 基因是获得真核结构基因最主要而又最常用的方法。通过克隆构建cDNA文库． 1．2寻找载件：获得台适而又具有高转化率的载体——受体系统是基因工程的一个重要方面．载体就是把外源基因(目 的基因)导入受体细胞使之得以复制和表达的运载体．作为理想的载体，应具备的条件； (1)载体必须有自主复制的能力，即具有复制起点和能使所携带的外源DNA在受体细胞内忠实复制，高效表达的调控 系统。 (2)有适宜的限制酶切点，最好是对多种限制酶有单一切点，而且酶切点在易于被检测的表型基因上。 (3)具有易检测对重组体DNA进行选择性遗传标记．若此种标记有两个以上则更为理想。因为一个可用以检测载体是 否连接上日的基因；另一个则可用来检测重组体DNA是否转入到受体细胞内． (4)载体的分子量应小，且能在受体细胞内扩增较多的拷贝，这样的载体易于操作，又可使克隆基因的剂量增加。 339 (5)可携带外源DNA的幅度较宽。 124质粒等， 目前常用的质粒基因载体是大肠杆菌质粒，分别有抗四环素基因PSCl01质粒和抗氨苄青霉素基因的RSF2 这些是天然载体．PBR332质粒是科学家在天然质粒的基础上，应用重组体DNA技术陆续构建的更为理想的载体，是目前使 用最为广泛的一种。 病毒基因载体是大肠杆菌^噬菌体。科学家们采用了点突变、缺失和替换方法进行了各种改造，获得了一系列的^噬 菌体衍生物