ITS和Leptin对牛卵母细胞体外培养和胚胎生产的影响研讨.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十三届学术研讨会论文集 ITS和Leptin对牛卵母细胞体外培养和胚胎生产的影响研究 梅承1’2施振旦1吴嫦丽2曹善柏2 (1华南农业大学动物科学学院广州510642，2广州市华美牛奶公司广州510663) 摘 要：利用ITS和Leptin促进体外成熟和体外培养的牛卵母细胞的发育和质量，探讨提高胚胎 体外生产时的质量和数量的方法技术。试验组在体外受精的胚胎的培养液KSOM中添加10u1／ml浓 度的ITS，结果使胚胎的桑椹胚率和囊胚率显著高于培养液中不加ITS的对照组胚胎(桑椹胚率： 43．48％VS 29．07％，囊胚率：22．83％vs11．63％，尸0．05)，卵裂率、正常分裂率和8细胞率与对 照组差异不显著。说明在培养液中添加ITS能显著提高体外受精培养的桑椹胚率和囊胚率。另外在 卵母细胞的体外成熟液中添加10ng／ml具有生物学活性的重组鸡Leptin成熟肽融合蛋白培养卵母 细胞，试验组和对照组卵母细胞经体外成熟、受精后转入加有10uI／mlITS的KSOM培养液进行体 外培养。试验组卵裂率和正常分裂率极显著高于对照组(88．96％vs66．81％，61．11％VS29．36％，尸 0．01)，8细胞率显著高于对照组(84．84*／,VS 受精的桑椹胚率和囊胚率与对照组差异不显著，但最后的囊胚数量较对照组增加了一倍多。这些结 果说明，在卵母细胞的体外成熟培养中添加Leptin对牛卵母细胞体外成熟有促进作用，可显著提高 卵母细胞受精后早期胚胎的卵裂率、正常分裂率和8细胞率；在早期胚胎的体外培养液KSOM中加入 ITS则能提高桑椹胚率和囊胚率；而Leptin和ITS的按顺序结合使用，则能够大大增加体外生产胚 胎的桑椹胚和囊胚的数量，亦即胚胎体外生产的效率。 关键词：奶牛体外受精ITSLeptin 卵母细胞在体外首先要进入成熟阶段，同时也只有成熟的卵母细胞才能用于IVF。所以卵母细 胞的体外成熟就显得特别重要。卵母细胞的成熟包括细胞核和细胞质的成熟。目前牛卵母细胞的体 外成熟率可以达到90％，完成正常受精和卵裂的卵子可以达到80％，但其中能够发育为可用于移植 的囊胚只有20--一30％，这可能与卵母细胞细胞质的成熟不充分有关。 Leptin又称瘦素，是肥胖基因的产物。研究发现，除了对动物摄食、能量代谢和新陈代谢等有 影响之外，Leptin对动物的生殖功能也有着影响。它在一定程度上可促进卵泡的生理功能，增加卵 巢上卵泡的数量¨j。 在继续探索扩大卵母细胞来源、提高卵母细胞成熟率和体外受精率的同时，很多研究人员重点 研究了如何提高体外受精胚胎的体外发育率。目前常用的培养方法有中间受体培养法和完全体外化 培养两种。由于中间受体培养法费用高，技术过程复杂，胚胎回收率也较低，不适合大批量生产， 目前更多的是采用完全体外化培养。由于完全脱离了输卵管一子宫内环境，IVF胚的进一步发育所 需要的众多营养成分、激素以及其他一些尚不明确的蛋白质、多肽因子均要设法满足。以往的研究 显示，胰岛素与胰岛素样生长因子能阻止细胞凋亡，促进细胞的增殖，对胚胎的发育有利【2】。 本试验通过在成熟液中添加重组鸡Leptin融合蛋白和培养液中添加ITS对卵母细胞进行体外成 熟和培养，统计正常卵裂率、8细胞率、桑椹胚率和囊胚率。研究Leptin对卵母细胞体外成熟以及 ITS对胚胎体外培养的影响，寻求进一步提高体外生产胚胎囊胚率的方法。 1材料与方法 1．1主要试剂 150 中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十三届学术研讨会论文集 用Leptin为具生物学活性的重组鸡Leptin成熟肽融合蛋白，由本实验室制备【3】。 3．85mg／ml的Hepes、0．4mg／ml碳酸氢钠和l％(VⅣ)抗生素等配制而成。 成熟液 存。使用前加入7．5％胎牛血清和0。5 FSH。 u酌：Ill u g／roa 肝素，pH为7．5-7．7，渗透压为300±10mosm。