智能凝胶载体固定化纤维素酶提取植物活性成分.pdfVIP

华 南 理 工 大 学 学 报 (自然科 学版 ) 第40卷 第 1期 JournalofSouthChinaUniversityofTechnology (NaturalScienceEdition) Vo1．40 NO．1 2012年 1月 January 2012 文章编号：1000—565X(2012)叭一0125—06 智能凝胶载体固定化纤维素酶提取植物活性成分水 周建芹 陈韶华 (1．苏州大学 药学院，江苏 苏州215123；2．苏州大学 医学部实验中心，江苏 苏州 215123) 摘 要：为提高植物活性成分的提取率，同时实现酶的重复利用，以智能凝胶材料N．琥珀 酰壳聚糖(NSC)为载体固定化纤维素酶．文中首先采用红外光谱仪和 x射线衍射仪对 NSC的结构进行 了表征，并研究 了其 pH敏感性．随后探讨 了NSC固定化纤维素酶 (NSCC)的制备条件；最后以银杏叶为模式材料，用NSCC水解提取黄酮类化合物，并确定 了NSCC水解的最适温度和 pH值．结果表明：琥珀酸酐与壳聚糖 中的氨基反应生成 了 NSC，且琥珀酸酐的引入使壳聚糖中的结晶区减少；NSC具有对溶液pH值敏感的可逆溶 解性，NSCC也表现出类似的pH敏感性；NSCC的最优制备条件为pH5．0、1一(3．二 甲氨基 丙基)一3．乙基碳二亚胺盐酸盐用量 10mg、纤维素酶用量 15mg；NSCC水解能显著提高银 杏叶粉 中黄酮类化合物的提取率，提取率仅略低于游离酶，且NSCC可以重复使用；NSCC 水解银杏叶粉的最适温度是45—55℃，最适 pH值是 5．0． 关键词：N一琥珀酰壳聚糖；纤维素酶；固定化；活性成分；提取 中图分类号：Q814 doi：10．3969／j．issn．1000．565X．2012．01．022 壳聚糖是 自然界中含量最丰富的多糖，且用途 催化反应时固定化酶完全溶解于溶液中，与底物充 广泛．在酶工程方面，壳聚糖作为载体固定化酶具有 分接触；完成反应后改变溶液温度或者 pH值 ，固定 显著的优点，如不溶于水、生物相容性好、可以加工 化酶从反应体系中析出，与底物分离，反应结束；回 成各种形态、具有功能基团等…．在过去的研究中， 收的固定化酶重新溶解后，可以重复使用．总之，智 壳聚糖被制成各种形态的载体，实现了脂肪酶、蛋 白 能凝胶材料固定化酶既具有传统固定化酶容易分 酶、漆酶等多种酶的固定化 。J．酶固定化到壳聚糖 离、可循环利用的特点，又克服了其存在扩散限制的 载体上后，不溶于反应溶液，可以很容易地从体系中 缺点 ． 分离出来，实现酶的重复利用，而且不会对产物造成 N一琥珀酰壳聚糖 (NSC)是一种对溶液 pH值敏 污染．然而，这种不溶性的材料作为载体固定化酶 感的智能凝胶材料，由壳聚糖分子链上的氨基被琥珀 后，酶促反应变成了非均相反应，而且存在底物和产 酸酐修饰后生成．NSC对溶液pH值敏感 ，在中性和 物的扩散限制 ，所以催化效率降低，尤其是水解 碱性条件下溶解，在酸性条件下析出，而且修饰程度 大分子底物、固体底物的效率较低 ． 不同，溶解性能也随之变化．基于NSC的pH值敏感 采用可逆溶解的智能凝胶材料 固定化酶可以克 性能，NSC主要用作绷带的材料、药物的载体等 。． 服采用传统固体载体固定化酶的局限性．智能凝胶 文中以NSC为载体固定化纤维素酶