高原鼠兔血红素氧合酶1的基因克隆及序列分析研究.pdfVIP

· 314 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013，29(2)：314-319 [文章编号] 1000—4718(2013)02—0314．06 -- -】L_I Ej 同 原鼠兔血红素氧合酶 1的基因克隆及序列分析术 杜 杨， 杨应忠， 马 燕， 曹雪峰， 格 日力 (青海大学医学院高原医学研究中心，青海 西宁810001) [摘 要] 目的：克隆高原鼠兔血红素氧合酶 1(hemeoxygenase．1，HO—)基因eDNA的全长序列，并分析其 序列特征，为进一步揭示高原鼠兔低氧适应的分子机制提供有益参考。方法：从高原鼠兔肝组织中提取总RNA， 利用逆转录聚合酶链反应 (RT—PCR)技术和cDNA末端快速克隆(RACE)技术扩增出HO—基因eDNA全长序列并 进行测序，测序结果采用生物信息学的方法进行分析。结果：克隆所得鼠兔HO—基因eDNA全长片段大小为 1 466bp，与预期一致，编码区长度为873bp，编码290个氨基酸 (GenBank登录号为：JX035934)；序列分析结果显示， 核苷酸序列和推测的氨基酸序列相似性比较 ，与兔、人、牛、小鼠、大 鼠、猪和马的HO—J核苷酸序列的同源性分别为 89％、87％、85％、79％、84％、85％和85％，与兔、人 、牛、小鼠、大鼠、猪和马的HO—J氨基酸序列的同源性分别为 89％、85％、84％、80％、79％、82％和67％，显示出高度保守性。构建的基于氨基酸序列的分子系统进化树聚类结 果表明，高原鼠兔与兔的进化距离最近。结论：本实验首次成功克隆出高原鼠兔 HO一』基因eDNA全长序列，为从 低氧细胞保护角度，进一步探讨青藏高原土著物种适应高原的分子生物学机制研究提供实验依据。 [关键词] 高原 鼠兔 ；血红素氧合酶 1；低氧适应；eDNA克隆；序列分析 [中图分类号] R363 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000．4718．2013．02．022 Cloningand sequencingofhemeoxygenase-1genefrom Ochotonacurzo- n／d e DU Yang，YANG Ying—zhong，MA Yan，CAO Xue—feng，GE Ri—li (ResearchCenterforHighAltitudeMedicalSciences，MedicalCollegeofQinghaiUniversity，Xining810001，China．E— mail：geriligao@hotmail．com) [ABSTRACT] AIM：Tocloneandanalyzethehemeoxygenase一1(HO—)genefromOchotonacurzoniae(plateau pika)．METHODS：TheeDNAofHO—JwasclonedbyRT—PCRandrapidamplicationofeDNAends(RACE)fromthe liverofOchotonacurzoniae．ThebioinformatieanalysisofHO—Jgenewasperformed．RESULTS：ThecDNAofHO—Jgene inOchotonacurzoniaewasobtained．ThedataofthesequencewasdepositedintoGenBankandthea(e‘ssionnumberis JX035934．ThefulllengthofcDNAwas1466bp，including873bpencodingsequence(290aminoacids)．Homology comparisonshowedthattheDNAsequenceoftheHO—JgenewashighlyhomologouswithOryctolaguscuniculus(89％)， Homosap／ens(87％)，Bostaurus(85％)，Musmiiscll,lllS,(79