MDR1基因多态性与肝癌肝移植预后的相关性研讨.pdfVIP

中国科协第四届优秀博士生学术年会论文集 MDRl基因多态性与肝癌肝移植预后的相关性研究牛 吴李鸣郑树森 卫生部多器官联合移植研究重点实验室，浙江大学医学院附属第一医院肝胆胰外科，杭州，310003 摘要 resistance1，MDRl)多态性与肝细胞癌 目的：探讨多药耐药基因1(multidruggene 果：MDRl MDRl 2677A携带型的无瘤生存率显著高于非携带型，总体生存率无统计学差异．MDRl 示：MDRl 2677A 携带情况是影响肝癌肝移植术后肿瘤复发的独立因素． 关键词外科学；多药耐药基因l；癌；肝移植 全球每年约有37万多患者被新诊断为肝细胞癌【l】。肝移植作为一种临床根治性手术，从20世纪60年代起开 始用于治疗HCC，然而其确切疗效一直是移植学界争论的焦点【2l。移植术后肿瘤复发就是影响其疗效的重 要因素。如何及早有效地预测肝移植术后肿瘤复发的风险，制定出合理的术前受体选择标准已成当务之急。 resistance l，MDRl)基因型与肿瘤的发生、发展具有密切的 最近大量研究表明多药耐药基因l(muhidruggene 儿童急性淋巴细胞白血病(—u上)患者的中枢神经系统治疗后的疾病复发率明显低于其他基因型。然而，目前尚 缺乏MDRl基因多态性对HoC预后作用的相关研究，有关其与肝癌肝移植患者预后的关联更是未见报道。本研究 以中国人@MDRl基因最常见的单核苷酸多态性为切入点(包括C1236T，G2677A／T，C3435T)【7一，通过检测 肝癌肝移植患者MDRl基因上述位点的多态性，探讨MDRl基因多态性与预后的相关性，从而为指导临床及早 预测肿瘤复发、建立更合理的肝癌肝移植受体选择标准提供新的参考指标。 1对象和方法 1．1研究对象 均获得随访并纳入本研究中。50例HCC肝移植患者的平均生存时间为16．1个月，中位生存时间为16．3个月 素或他克莫司(FK506)为主的三联方案；全组患者术后未接受常规化疗；移植患者术后进入随访程序， 常规进行甲胎蛋白(AFP)监测、B超、胸片及全身骨骼ECT等检查。 ‘本研究得到国家重点基础研究发展计划资助项目(2003CB515501)资助 144 生物技术 1．2 MDRl基因多态性检测 DNA 获取患者EDTA抗凝血10mL，应用QtAamp 制性片段长度多态性(PCR．RFLP)法进行基因多态性分析。以0．20．5lag基因组DNA为模板进行PCR反应， 4 PCR反应体系共50lal，其中包括50ng／pL基因组DNAlaL，10xPCR缓冲液5uL，氯化镁(1retool／L) 4laL，dNTP(200pmmol／L)2laL，上下游引物(O．2pmmol／L)各2pL以及Taq酶(1U／laL)0．6laL，余用双蒸水 10min后，94℃变性45 s、72℃延伸45s。共循环34 s、54℃(C1236TG2677A，T)或56’C(C3435T)退火45 次，最后再72℃延伸10 取回收产物6 IIL反应体系中37*C水浴过夜进行酶切反应。产物经15％聚 laL，加入lu限制性内切酶，在20 丙烯酰胺凝胶电泳后银染判定结果。考虑到PCR．砌玑P法可能引起的酶切不彻底的缺点，实验采用DNA直 接测序方法的方法进一步验证了结果的可靠性。 表1 MDRl基因多态性分析的引物序列、限制性内切酶及酶切后片段长度 1．3统计学分析 所有统计分析均采用SPSS (