n3+PUFA甘油酯的酶法合成和结构分析研究.pdfVIP

程毽In 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19-23 n．3 PUFA甘油酯的酶法合成和结构分析 章超桦’刘书成洪鹏志吉宏武 广东湛江海洋大学食品科技学院，524025 PUFA甘油酯，通过RSM设计获得酶 摘要：利用脂肪酶Novo435在正己烷中催化合成n．3 法合成的最佳过程参数：PUFA 1．69，甘油用量109，有机溶剂用量20ml，初始水分含量2．4％， 酯化度达到90％以上。N一3PUFA甘油酯外观为澄清透明的亮黄色液体，无鱼腥味，流动性好， 理化指标均达到食用油脂的标准。紫外光谱分析表明n．3PUFA甘油酯具有油脂特征。GC分 PUFA甘油酯中的组分有甘油一酯、甘油二酯和甘油三酯；有五种甘油一酯化合物。 HPLC—APCI-MS的分析表明n．3PUFA甘油酯中有13种甘油二酯化合物和26种甘油三酯化合 物。因此n．3PUFA甘油酯是一种富含DHA和EPA的功能性油脂。 关键词：多不饱和脂肪酸；甘油酯；脂肪酶；合成；结构 日IJ舌 PUFA)，对人体主要具有以下生理活性：增强神经系统功能，益智健脑，预防老年性痴呆症； 抑制血小板凝聚，减少血栓形成，防fI}：心脑血管疾病；抗炎、抗癌、增强自身免疫力；保护 视力等。在天然鱼油中，n．3PUffA(主要是DHA和EPA)一般是以甘油三酯的形式存在， 其相对含量比较低，保健和医疗效果比较差，难以满足消费者的需要。为了提高n．3PUFA 的保健和医疗效果，众多研究者将甘油酯中的n一3PUFA转酯化或者水解转化为相应的乙酯 型或者游离型，然后再通过各种物理或者化学方法提高n一3PUFA的含量，以此来增强DHA 和EPA的保健和医疗效果。Ikuo等【l’2】研究的结果表明，n．3PUFA乙酯型在人体中消化和吸 收比较困难，而且可能存在安全隐患；n．3PUFA游离型虽然易于被人体消化和吸收，但是容 易氧化，而且有酸味、口感不好，直接作为食用难以被人们接受；n．3PUFA甘油酯型性质稳 定，易被人体消化吸收，而且是n。3PUFA的天然存在形式，因此n一3PUFA的甘油酯型是保 健品和药品的最佳产品型式。然而采用化学或者物理方法很难将鱼油中的n一3PUFA含量大 大提高。酶具有作用条件温和、专一性强、催化效率高和生成产物易分离等特点，因此，生 物酶技术富集n．3PUFA是一种非常有效的方法i3】。利用脂肪酶将n．3PUFA富集在甘油酯中 的方法有水解法、酯交换法和酯化合成法。前两种方法由于受天然鱼油中n一3PUFA含量低 的限制，使得n一3PUFA在甘油酯中的含量仍然得不到较大提高，脂肪酶酯化合成方法就为 此提供了一个重要的技术途径。酶法合成n．3PUFA甘油酯是利用脂肪酶催化游离的n一3 。通讯作者：章超桦。E—mail：zhangch@zjou．edu．cn。Tel(Fax)：0759-2382049。 228 擅毽ln 第三届海洋生物高技术论坛 2005。08。19-23 PUFA与甘油发生酯化反应生成甘油酯，将n一3PUFA富集在甘油酯分子上[31。 本研究以实验室从黄鳍金枪鱼鱼头中提取的鱼油为原料，利用尿素包合法富集其中游离 的n一3PUFA，在脂肪酶的催化作用下与甘油发生酯化合成反应，研究酯化合成反应的过程参 数对酯化度的影响，并对n。3PUFA甘油酯的理化性质和组成及结构进行分析和鉴定。 1材料与方法 1．1试验材料 黄鳍金枪鱼鱼油，由本实验室从黄鳍金枪鱼鱼头(广东省南洋渔业公司提供)中提取得 到粗鱼油，然后再通过脱胶、脱酸、脱色和脱臭等精炼工艺获得精制鱼油【4】。 1．2试剂和仪器 甘油，分子筛(4A)，有机溶剂，氢氧化钠，乙醇，丙酮，正己烷等均为分析纯。 HHSZl．6电热恒温水浴锅； 高效液相色谱泵；ZQ4000质谱仪等。 1．3试验方法 1．3．1 n．3PUFA的制备一1 采用氢氧化钾乙醇溶液皂化法，再酸化处理得到混合脂肪酸，然后利用尿素包合法富集 n一3PUFA。最终游离型的脂肪酸中DHA和EPA的含量分别为68．14％和16．88％。 1．3．2 n．