PM25颗粒物引起血管内皮细胞氧化损伤的初探研究.pdf

PM2．5颗粒物引起血管卉皮细髓他掼伤的韧探 董晨宋伟民施烨闻 (复旦大学公共卫生学院环境卫生教研室 上海200032) 摘要 探索PMz5颗粒物引起心血管痰翥的帆期。方法：ECV304细骢暴露子不同浓度的PM2s颗粒物混愚液 (60．200．400pg／m1)．染毒24小时后运用MTT法涎缨魔存活率、湃定缌臆内SOD秘GSH含量．并进行流式细 胞仪分析凋亡来综合分析。结果：麓着染毒浓度上升．ECV304纲胞存活率邂渐下绛，死亡率逐渐上升：染毒浓度 为50，200、400pg／ml，细臆内GSH食量(mg／gprot)分别为20．643±2。167、16．774±2．911(PO，05)， 1 7±O．45{ z (P0．01)o结论：PMs可通过氯化摄伤途径使血警内皮细胞死亡．导致心盔警疾甓的发生。 关键词：ECV304氯化掼伤 心血管疾病 1 前言 流行病学研究表明，PM：．s与心血管疾病(缺血性心脏病、充血性心衰、心律失常)的发病率 和死亡率有关。如1980一1994年Burnett等在加拿大多伦多的调查，发现在控制了时间趋势和气‘ 候因素后，PM2．5每上升10 pg／m3，因呼吸系统及心血管疾病的入院人数上升3．3％；进一步控制气 态污染物的影响，该数值为O．75％；PM：，污染引起的每日入院人数的增加量，占混合大气污染的 1 8．0 1．8％；PM25每上升1．0 3(相对于平均值1 pg／m pg／m3)，心律失常的人院人数增加4．33％； PM25每上升3．0pg／m3，缺血性心脏病和心衰的入院人数分别增加5．73％及4．70％。 2材料和方法 2．1主要试剂 DMEM培养基、胰蛋白酶购于Gibco公司，胎牛血清购子杭州四季青生物工程材料有限公 司。MTT购于Sigma公司，ECV304细胞由中科院细胞所提供，玻璃纤维滤纸由河北省故城县环 境监测器材厂生产，SOD、GSH、总蛋白试剂盒购自于南京建成生物工程研究所。 2．2仪器设备 大流量采样器为安德森采样器公司产品。318MC型酶标仪为上海三科仪器有限公司产品。超 净工作台为上海汇龙仪表电子有限责任公司环境工程装备分公司产品。CO：培养箱为NAPCO公司 Becton Dickinson公司产品。 2．3大气PM：5采样及处理 取200×250mm2的玻璃纤维滤纸，放在100℃恒温箱中1～2小时。采样时，用镊子将滤纸放 在采样器的滤纸夹上，铺平，压紧，固定。置采样器于20m左右高度处，接通电源后，以调压器 控制流量为1．1～1．7m3／min流量。采样后，取下滤纸放入干燥器6小时。将载有颗粒物的滤膜剪 成lcm x 2小块，浸于三蒸水中，超声震荡30min4次，洗脱颗粒物，震荡液经六层纱布过滤，滤 国家自然科学基金专项基金资助(No 第一作者董晨，复旦大学环境毒理学专业硕士研究生。 一98— 液4℃10000转／分离心20min后收集下层悬液于玻璃平皿中，冷冻真空二F燥，低温冰箱保存备用。 称取一定量样品，用DMEM细胞培养液配成储备液，超声震荡l5min，使储备液灭菌，4℃保存。 临用前仍需超声震荡5min，使颗粒物混匀，并用细胞培养液稀释至所需浓度。 2．4细胞的复苏及传代培养 冻存内皮细胞复苏后，用含lO％胎牛血清的DMEM细胞培养液接种于细胞培养瓶，于 5％CO：，37℃恒温培养箱中培养。细胞生长形成单层时，吸去培养液，PBS清洗3次，加入 0．125％胰蛋白酶和0．01％EDTA混合消化液消化，按l：3的比例传代。 2．5剂量分组 实验共分为四组，分别为：对照组；50ug／ml；200gg／mI；400lag／ml。 2．6MTT法测血管内皮细胞存活率 3x 接种200lal 物混悬液，每组设8个平行孔，并设3个对照孑L，即只加同浓度的颗粒物混悬液，培养20小时。 每孔加入MTT溶液20¨l，继续培养4小时。去培养液，加200laiDMSO溶液。