离子注入在维生素C的一步发酵高产菌株选育中的研讨.pdfVIP

摘贾 Y$is 离子注入在维生素c的一步发酵高产菌株选育中的研究 吕树娟 (生物物理专业) 导师:余增亮研究员姚建铭研究员 (中国科学院等离子体物理研究所离子束生物工程学重点实验室， 安徽 合肥 230031) 摘要: 维生素c的葡萄糖一步发酵法作为Vc生产领域的革命性创新方法，近年来引 起国内外普遍关注，此方法相对于现有的发酵法:“莱氏法”、“二步发酵法”来 说，具有不可比拟的优越性。 本论文研究利用离子束诱变育种技术选育维生素c一步发酵高产菌。 首先分析了注入离子的种类、能量和剂量等参数对一步发酵生产菌诱变的生 物学效应，确立了巨大芽抱杆菌的最佳诱变参数:N,20k?V、剂量选择1.6X10-- 2.0X1沪ions/cm.s;氧化葡萄糖酸杆菌最佳诱变参数 :N,10koV, 2.34X10ions/cm，一3.9X10ions/cm·se 然后通过离子注入对Vc一步发酵生产菌的大量筛选，获得一株高产菌KB13 在4%葡萄糖浓度下，产2-酮基一L一古龙酸 (Vc的前体)达24.4g/L，对糖的 转化率达61%。随后进一步对高产菌株KB13的发酵工艺做了优化，在综合考虑了 培养基和培养条件等因素的基础上，初步确立了高产菌的发酵工艺;同时我们也 对KB13的发酵液成分进行了初步鉴定。 最后针对混合菌株的伴生发酵特性，我们从生化角度和分子生物学角度初步 研究了伴生活性机制，得出伴生活性物质可能是某种易失活的蛋白的结论;同时 通过RAPD试验也验证了离子注入造成了基因差异而导致遗传性状发生改变。 关键词:VC生产菌，一步发酵，离子注入，菌种选育 离了注入在维生素C的一步发醉高产菌株选育中的研究 StudiesonBreedingofHigh-ProducingStrainsinDirect FermentationofVitaminCbyIonBeamImplantation LVShujuan(Major:Biophysics) DirectedbyprofessorYUZengliangandProfessorYAOJianming (Key Laboratory of Ion Beam Bioengineering, Institute ofPlasma Physics,ChineseAcademyofSciences,Hefei230031,China) Abstract: AsaninnovativemethodinthefieldofVitaminCproducing,direct fermentationfromD-glucoseto2-keto-L-gulonicacid(2-KLG,theprecursor ofVc)hasbeenpaidgreatattentionintheworld.Comparedwith conventionalmethodssuch as ReichsteinMethod”and Two-Stage Fermentation，thisnewmethodhasoverwhelmingadvantages. Inthisthesis,thebreedingofhigh-producingstrainsindirect fermentationofVitaminCbyionbeamimplantationisreported. Thefirstpartofthisthesisisabouttheselectionofthetype,energy anddoseoftheionthatwasusedinimplantingtheoriginalstrains-- BacillusmegteriumandCluconobactaroxydans.Throughthisresearch,it wasfoundthat20keVN`withthedoseof1.6X10-2.OX10ions/cmz.sand 10keVNwiththedoseof2.34X10ions/cmz-3.9X10ions/cm.s were optimalforB.megter