类固醇激素合成急性调节蛋白StAR在血管内皮细胞中的表达及对ABC蛋白表达的影响研究.pdfVIP

类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)在 血管内皮细胞中的表达及对ABC蛋白表达的影响 宁艳霞马采杰 江一峰陆超赵凤娣殷莲华 陈思锋 复旦大学上海医学院生理与病理生理学幕，上海，200032 关键词病理生理学 类目酵激素合成急性调节蛋白 血管内麦细胞 一、刖昌 acute 类固醇激寮合成急性调节蛋白(st钟oidogenIcreguktory 素生成组织中发现的，对类弱醇激素合成具有重要限速作用订】．StAR可介导褪澜醇由线越体外朕转 到线粒体内膜，之后胆圈酵在线粒体内细胞色素氧化酶的作用下转化为极性璺强、曼易流出细胞的氧化 圈醇【l】．因此StAR有助于腮圃簿流出，可能参与了动脉粥样硬化中题固醇逆向转运过程． 随着研究的深入。人们发现StAR除了存在于类巍醇激素生成维织外．还表达予其他维织中．其中 研究最多的是艇胶．在肝细腿中，StAR同样具有将腿网醇由线粒体外貘转入内膜的作用，是胆汁酸性 血浆胞固酵代谢平衡有熏要作用。可通过核内同醇类受体调节维持胆网静代谢平衡关键基因的表 达口一胡，以达到预防和治疗诸如动辣粥祥硬化等与脂质代谢紊乱相关疾病的目的． 朦质代谢紊乱是动脉粥样硬化发生的重要发病环节，而斑管内皮细胞剜是其发生发展的始动环节． 维持胆圈醇代谢平衡尾预防动赫粥祥硬化发生的有效手段．如果胆管内皮细胞可将过多的胆弱醇等脂 类物质由细胞内排出n】，将可阻止过多的脂质进一步向内皮下沉积，进而阻止或减缀动脉粥样硬化的发 生和发展． 我们前期的研究表明在大鼠心肌组织、小鼠脑，人主动脉和结缔组织等多种组织的血管内瘦细胞巾 StAR之后对腿固醇逆向转运蛋白ABCAl及ABCGl表述的影响． 二、材料与方法 (一)实验仅器 3 Tmns一Ⅸot Cell(Bio—R8d)。Milli 泳仪(Tanon)，凝胶图像处理系统(Tanon)。MiIli—Prolean TmnsferCdl(Bio—Rad)． Electrophore6c (二)主要试赉j labor鑫tories 小鼠脑血管内皮缨胞株一bEnd．3(美国ATcc收录)·胎牛血清(PAA ·23· TM 荆盒购自华美生物工程公司，其余试荆购自sigma公司，其他鬻用生化试剂为国产分析纯以上级．筹唾． (三)实验方．鲁 1．bEnd-3夏愿代大鼠心肌徽血管内皮细胞豹培彝 2．免疫细胞化学染色方法【ABc法l l 200． 稀释比铡为l 3．含s认R全长cDNA腺病毒载体的构建 窒任顺林博士惠蹭，能有效感染哺张细胞．该病毒扩增纯化服务由北京本元正阳基因技术有限公司提 EGFP)。 毛用含s执R全长由NA的豫病毒感染bEn也3细胞 中-12h后彝培弊液．分别加入O．5或1d新鲜培养漩，以感染复数(muItipl．dty lO的比例加人腺病毒．词时设瞿石加腺瘸毒组及加入网等艨瘸毒空载体缝，效鬣细胞培养箱2h，其同每 箱静置培养．平感染48h后，按实骏衙要分剐提取细胞总RNA或蛋良进行实验。 5．R∞l一¨meRT—PCR 序列如下， StAR上游引物I5，一TTGGGCATACTCAACAACCAG一3‘； 下游引物l亨一GACATTTGGGTTCCACTCTCC一譬I GAPDH上游引锈；宁一CCATTTGCAGTGGCAAAAG一了， 下游弓I物：5’一CACCCCATTTGATGTTAGTG一3．I 下擗等I物t5．一AGCAcTGTAGGATGGTCACC一37l ABCGl上游引物15。一GTACCATGACATCGCTGGTG