可利用果葡糖浆发酵生产聚β羟基丁酸的菌株选育及其发酵工艺条件的研讨.pdfVIP

可利用果葡糖浆发酵生产聚p一羟基丁酸的 菌株选育及其发酵工艺条件的研究 马涛刘长江赵增煜 (沈阳农业大学食品科学系．沈阳110161) 摘要以果葡糖浆为碳源，对真养产碱杆菌生产聚B一羟基丁酸进行了探索。研究结果表 明，由Aladigeneaeutrophus通过诱变处理筛选出的优良菌株9813．在7L台式发酵 罐中进行分批补料与流加控制两种培养模式中进行培养48h。均能较大幅度地提高 体积生产率，与不朴料相比，发酵液中细胞干重从26．29／L分别增加到32．29／L和 率有所提高。 关键词聚目一羟基丁酸；果葡糖浆；真养产碱杆菌；发酵工艺 1前言 塑料作为一种石油化学合成的高分子聚合物，具有质轻、价廉、强度高、易加工、化学稳定 性好等特点，在全世界被广泛应用且呈逐年递增态势。正因为如此，化学合成的塑料在自然环 境中很难分解，越来越多的塑料垃圾构成对环境及生态的巨大危害。生存环境的压力和可持 续发展的要求，迫使人们寻求使用可被生物降解的材料代替石油化学合成塑料的可能性。 在众多的生物可降解材料中，PHB被认为是目前可能替代石油化学合成塑料的具有发展 在某些营养元素缺乏条件下合成的细胞内碳源和能源的贮藏性聚合物之一。由于PHB具有 与化学合成塑料相似的性质，能拉丝、压模、注塑等，更具有与化学合成塑料所没有的生物降解 性、生物相容性、光学活性，可利用再生资源进行生物合成等【1q】。所以自1925年被 Lemoigne首次发现后【4J。引起世界各国科学家的关注，迄今为让。对它的研究仍在进行 着【5_9j。在所发现的能产生PHB的300余种细菌中，真养产碱杆菌(Alcaligoneseutrophhus) 尤为引人瞩目。该菌的PHB产率以PHB占干细胞重量的百分率计最高达96％。且生物学性状 稳定．所以对它进行的研究最多。然而该菌的缺点是不能直接利用双糖或多糖等较廉价的碳 源，且单位体积生产率较低。因此，构建高产量工程菌，选育能利用廉价原料的菌种(株)和优 化发酵工艺条件及改进分离、提取工艺以降低生产成本，则成为实现PHB工业化生产的关键 技术。 ， 果葡糖浆是由淀粉转化而来的一类淀粉糖品，其主要成分是果糖和葡萄糖。因其原料可再 生，来源广泛，成本低廉，产品纯正，甜度高，适用范围广，近年来发展极为迅速rlo]。由于Al， caligenes 利用果葡糖浆发酵生产PHB的可行性，通过菌种选育和发酵工艺条件的研究．为早日实现 177 PHB的工业化生产和拓展淀粉利用新途径奠定基础。 2材料与方法 2．1菌种 真养产碱杆菌(Alcaligeneseutrophus)H16。 2．2培养基 (2)种子培养基(dE)：蛋白胨10．0，牛肉膏3．0，NaCl5，0，pH7．0。 (3)微量元素液(g／L)：H38030．3，COCl2·6H200．2，ZnS04·7H20 0．010 0．03，NaM004·2H200．03，NiCl2‘6H200．02，CuS04‘5HzO (4)无机元素液(g／L)：Na2HP04·7H209．0，KH2P04 0．2，柠檬酸铁铵 1．5，MgS04·7HaO 0．06，CaCl2-2HzO0．01，微量元素液lmk 色度≤O．045．透光度≥97．0％，硫酸灰分≤0．10％。 (6)筛选培养基：无机元素液中添加硫铵作氮源(浓度0．2％)，果葡糖浆为碳源(浓度 2％)。pH7．0。 (7)发酵培养基：同筛选培养基。 2．3培养方法 角瓶中装液量100mL，摇瓶转速为150r／rain，温度为30℃，培养48h。 为30s，60s，90s，120s。150s)。 过通气和搅拌逮度加以控制。发酵过程采用分批补料与流加控制两种培养模式。 2．4分析方法 重。 (2)PHB测定