大肠杆菌基受态细胞制备方法的优选研究.pdf

第二届中国资源生物技术与糖工程学术研讨会论文集 2007．07．15．18威海 大肠杆菌感受态细胞制备方法的优选 温建新”，周顺2，黄保远4，董霜4，任慧英2，刘文华2，邹玲2，李迎军2，王金宝订 山东省农业科学院济南250000；4山东省巨野县畜牧局荷泽274900 摘要：以大肠杆菌DH5Q、JMl09为受体菌，质粒DNA加入感受态细胞，经短暂冰浴和热休克后， 直接涂布预热至37℃的平板或加入LB培养基，复活一定时间后涂板。研究不同型号的菌株、不同 转化溶液、感受态细胞的存放时间、转化时间及转化后的复苏时间等对质粒转化效率的影响。结果 复苏直接用无菌水进行8倍稀释，涂平板筛选转化子，可获得较好的转化效率，每微克(1a g)质粒DNA 可以得到高达105个转化菌落。转化溶液浓度和感受态细胞的存放时间对转化效率有明显的影响，而 转化时间、冰浴时间和转化后的振荡培养复苏时间对转化效率的影响不明显。 关键词：大肠杆菌感受态细胞；制备方法；优选 The ofDifferentEscherichia Cells Methods Optimization Coli．CompetentPreparation WEN Wcnhua Jianxin“。ZHOUShunz,HUANGBaoyuan4,DONGShuan94，RENHuiying2。LIU 2j ’一 ZOULin Jinbl0‘3 2，LI Y—in舀un2，WANG lShan AnirnalScience 265200：2Lai AgricultureAnimal DongAgricultureUnivisty College．Taian Yang Univisty Science Dao266l09 Researchinstitute JuYe College，Qing ：3Agriculture SAAS，Jinan。250000；4husbandry 274900 Ze station，He Abstract： numberoffactors bacterium Objective：A including strains，transformation durationand durationwereevaluatedfortheireffectstransformationof on ability storage competent Escherichiacolicells．Methods：Thevarioustimeincubationof cellswith oniceand competent plasmids onto warmedbeforehandto37℃．Thedifferenteffectsofthetransformative agar spreading plates whichincludedbacterium the condition cellsstat