益气活血解毒方对HUVEC内VEGF表达的影响.docVIP

精品论文 参考文献 益气活血解毒方对HUVEC内VEGF表达的影响 四川省成都市大邑县中医医院 四川省大邑县 611330 【摘 要】目的：观察益气活血解毒方对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）内血管内皮生长因子（VEGF）的影响。方法：采用免疫细胞化学法检测HUVEC内VEGF的表达。结果：益气活血解毒方在10%—20%浓度范围内，可减低HUVEC内VEGF的表达，且随着中药浓度的增加，降低作用越明显。结论：益气活血解毒方（10%—20%）可降低HUVEC内VEGF的表达。 【关键词】益气活血解毒方；内皮细胞；血管内皮生长因子 Effect of Yiqihuoxuejiedu Formula on the expression of VEGF in HUVEC 【Abstracts】Objective：To observe the effect of Yiqihuoxuejiedu Formula on vascular endothelial growth factor（VEGF）in human umbilical vein endothelial cells（HUVEC）. Methods：Immunocytochemistry was used to detect the expression of VEGF in HUVEC.Results：In 10% - 20% concentration range of Yiqihuoxuejiedu Formula，can reduce the expression of VEGF in HUVEC and with the increasing concentration of Chinese medicine，reduce the effect is more obvious. Conclusion：Yiqihuoxuejiedu Formula（10% - 20%）can reduce the expression of VEGF in HUVEC. 【Keywords】Yiqihuoxuejiedu Formula；Endothelial cell；Vascular endothelial growth factor 益气活血解毒方是依据益气、活血、解毒组方原则构成，是多年应用的一种有效改善结肠癌生活质量的方剂，由人参、薏苡仁、莪术、红藤、鸦胆子、喜树果等组成。肿瘤血管生成是指肿瘤细胞诱导的毛细血管生长及肿瘤血液循环建立的过程，它受多种促血管生成因子及抑制因子的作用，并有多种酶、细胞粘附分子的参与，其中血管内皮生长因子（VEGF）是目前已知最强烈的血管发生蛋白，它在结肠癌的生长、转移过程中起着重要作用[1]。本实验通过探讨益气活血解毒方对HUVEC内VEGF表达的影响，进一步影响血管生成，最终影响结肠癌的发生与转移。 1 实验材料 1．1 细胞株及动物 人脐静脉内皮细胞（HUVEC），四川大学华西妇儿院细胞培养室提供。SD大鼠30只，体重140—180g，雌雄各半，四川省中医药科学院实验动物中心提供。 1．2 试剂及药物 RPMI-1640培养基、胎牛血清、0.25％胰蛋白酶：均购自成都哈里生物工程有限公司。冷磷酸缓冲液（PBS）：自配。中药人参16g、薏苡仁24g、莪术24g、红藤24g、鸦胆子16g、喜树果16g购自四川省中医院。 2 实验方法 2.1 细胞培养 HUVEC正常用含10％新生牛血清的RPMl-1640培养液，在37℃、5％C02饱和湿度的培养箱中培养，待细胞生长至约90％汇合状态时，用含0.25％胰蛋白酶消化液进行消化，倒置显微镜下观察细胞质回缩、细胞间隙增大后，即加入含10％新生牛血清的RPMI-1640培养液进行终止，按一定细胞数进行传代。实验时取对数生长期的细胞进行实验。 2.2药物血清的制备 本实验需制备三组实验血清：无药血清组、阳性对照药物5-FU血清组和益气活血解毒方血清组。 取SD大鼠30只，雌雄各半，体重140-180 g，按体重分层后在随机分为3个组，每组10只，分别用于制备无药血清组，5-FU血清组，中药血清组。并进行动物分组均衡性分析，见表1。 各组体重总体均数无差异（Pgt;0.05），分组具有均衡性。 具体制备方法：将益气活血解毒方浓煎至每毫升含1g生药的汤剂，于4℃冰箱保存。制备无药血清组的大鼠每日灌胃生理盐水2ml/只，制备中药血清组的大鼠每日按8.96g/Kg/只灌胃，以上二组均每日灌胃3次；制备5-FU血清组的大鼠每次按25mg/Kg/只腹腔注射，一日一次，各组均连续给药