石蜡切片技术在蝗虫形态学中的应用.docVIP

精品论文 参考文献 石蜡切片技术在蝗虫形态学中的应用 李凌平 〔摘要〕石蜡切片不仅用于观察正常 细胞组织的形态结构, 也是病理学和法医学 科用以研究, 观察及判断细胞组织的形态变 化的主要方法, 而且也已相当广泛地用于其 他许多学科领域的研究中.教学中,光镜下观 察切片标本多数是石蜡切片法制备的。 〔关键词〕石蜡切片生物实验教学 应用 1 石蜡切片技术的流程 取材- 固定- 冲洗- 脱水- 透明- 浸 蜡- 包埋- 切片- 染色- 封蜡 1.1 取材：从蝗虫中取出要切片的部分，材 料要求新鲜，分别运用横切法或纵切法切取 要研究的部分，材料大小一般在3 乘3 乘2 立方毫。 1.2 固定：将取出的材料立即投入固定的 液中，目的是防止组织腐败和自溶，是它保 持原有的结构。在本试验中所用的固定液是 Bouin 氏液，固定的时间须8 小时左右。 1.3 冲洗：固定的材料一般要经过冲洗，目 的在于洗去标本中过剩的固定液，以免沉渍 于材料中影响制片和染色。一般用70%的酒 精冲洗数次直至除去黄色为止。 1.4 脱水：为使组织能完全包埋于石蜡中 切成薄片，组织经固定水洗后，必须先让它 完全脱去水分。 1.5 透明：将脱水后的组织块移入100%酒 精与二甲苯混合液(体积1:1)10-20 分钟 后，换入纯的二甲苯液30-40 分钟，直到组 织透明为止。观察组织块是否透明，可对着 光观察，组织呈糖饴的颜色或透明状即可。 1.6 浸蜡：将已透明的组织块浸入透明剂 与石蜡(体积比1:1) 的混合液中20-30 分 钟，然后移入已溶的纯石蜡I，纯石蜡II 各 一小时，逐步除去透明剂，使石蜡浸入组织 块的各个部分，便于以后进行切片。在浸蜡 过程需在恒定的60 摄氏度温箱中进行。 1.7 包埋：包埋方法可以用染色缸盖包埋， 也可以折一个小纸盒包埋，大小随组织块的 体积而定，也可以用金属铸成的无底包埋 框，下面放一白瓷砖包埋。包埋前准备一盆 冷水，一把镊子，一把小烫蜡铲，一个酒精 灯，一支玻璃管;包埋时在纸盒或其他容器 上涂上一层薄甘油，然后倒入融化的石蜡， 用镊子在酒精灯上稍加热，轻轻将组织块和 标签夹入纸盒或包埋框内，将要切的面朝下 摆正位置待蜡完全凝固后，剥去纸盒或包埋 框，保存蜡块待进一步切片。 1.8 切片：切片前需要修整好蜡块，并将它 固定在木块上，把每一小块蜡修成长方体。 1.9 染色：将切片放入二甲苯内5-10 分 钟，…… 1.10 封蜡：切片上以中性树胶，然后覆盖 上盖玻璃片，标本即可长期保。 2 试剂的配制 2.1 酒精的配制。取95%酒精75 毫升，加 入20 毫升水得到95 毫升，75%的酒精溶液， 取95%酒精80 毫升，加入10 毫升水得到95 毫升，80%的酒精溶液，由此可知，定容到95 毫升，用95%酒精作原料，取多少95%酒精， 便可得到百分之多少的酒精溶液。此法可配 制酒精浓度梯度。 2.2 H.E 染色剂的配制。取伊红1 克溶于5 毫升蒸馏水中，待全部溶解后，将冰醋酸逐 滴加入其溶液中，边搅拌，直到沉淀形成为 止，再加2 毫升蒸馏水，继续滴加冰醋酸，使 沉淀不再增加为止。 2.3 Bouinrsquo;s 固定液的配制。苦味酸水溶 液75 毫升，甲醛水溶液25 毫升，冰醋酸5 毫升。 3 试验中应当注意的问题 3.1 脱水。脱水过程中出现的问题主要是 脱水不净和过度硬化，脱水不净时二甲苯不 能渗入，蜡液不能渗入组织，可导致切片困 难，切出的片子在染色时易脱片。而组织蜡 块与空气接触后也会因水分蒸发而凹陷，故 脱水时一定要保证脱水液浓度达标，经常更 换新液，遇脂肪组织或疏松的纤维组织宜加 长脱水时间。 3.2 透明。二甲苯是最常见的透明剂，但其 收缩性强，极易是组织变脆，故在这一过程 中要严加控制，一般30 分钟就可以达到透 明的程度，但温度较低时可适当延长时间或 置于温箱中加热，另外在透明过程中还要注 意更换二甲苯，有时甚至更换两三次以上， 每次10 分钟左右，若二甲苯为旧液体，应选 择多的更换次数。 3.3 浸蜡和包埋。浸蜡和包埋要一次完成， 要尽量在恒温下操作，防止中间出现温度 差。蜡的温度要适宜，不能过高使组织烫坏 或使碎小组织变脆和变硬，也不能温度过低 使组织与石蜡脱离，蜡块中不能出现气泡， 裂隙和斑点。对于碎小组织要