发酵法生产谷胱甘肽及分离纯化的初步研讨.pdfVIP

发酵法生产谷肤甘肤及分离纯化的初步研究 邓利 谭天伟 (北京化工大学生物工程系，100029) 摘要 谷脱甘肤是一种广泛存在于动植物和徽生物细胞中的小分子蛋白质，它具有重要的生理功能， 在食品、医药等领城有重要用逮。本丈利用发阵法对谷耽甘肤进行了制备，时粗捉及分离纯化的方法 进行了初步研究。采用阳离子强酸性树脂对谷脱甘肤进行分离，并对分离条件及树脂的操作容1进行 了研究。 关健词 谷脱甘肤 制备 分离 树脂 x 谷胧甘肤 (GSH)是一种重要的活性三肤，是生物体内最重要的非蛋白琉基化合物。具有多 种重要的生理功能，在人体生化防御体系中起着重要的作用，如清除自由基、解毒、保护含琉 基酶的活性和延缓衰老等。人们对它的兴趣日益增长W。目前，从酵母细胞牛提取是GSH的主 导制造法。一般是从具有高GSH含量和高生长速度的面包酵母细胞中提取Iz]。提取的方法主要 有铜盐法、离子交换法以及双水相法，，〕。随着研究的深人，这几种方法也渐趋成熟，其中离子交 换法和双水相法己经成为主流方法。本文对酵母发酵获得GSH，并对发醉液中GSH进行了粗提， 用离子交换法分离纯化fu，对GSH的分离条件进行了较为系统的研究，为发酵法生产GSH提供 了基础。 1 材料和方法 .11 材 料 还原性谷胧甘肤 ()，各类树脂，盐酸，硫酸，甘氨酸，四氧啥陡 (Fluk:公司) 新鲜酵母细胞由北京化工大学生物工程实验室在2.7L发酵嫩培养而得，经离心，除去上清 液得到酵母细胞。 1.2 仪 器 722紫外分光光度计，蠕动泵，分部收集器，KLF2000全自动发酵罐 (Bi。公司) 1.3 实验方法 1.3.1鲜酵母的获得:使用GSH高积累菌株发酵法生产菌株 菌〔株为实验室自己从野生酵母菌 中筛选)，采用KLF2000全自动发酵堪 (装料2L)培养结束后，5000rpm离心，菌体冷冻备用， 供下一步的粗提和分离纯化。 1.3.2树脂操作容量、树脂交换速度的测定:树脂经预处理后，用静态法吸附测定。 1.3.3GSH含量的测定采用四氧RMIsl:(1)标准溶液的配制和标准曲线的绘制 ((2)样品中 GSH含量的测定 1.3.4 酵母细胞破碎法:(1)乙醇萃取 (2)热水萃取 (3)热水抽提 (4)超声波破碎 1.3.5GSH动态吸附和洗脱 (分离纯化):处理好的树脂装成lemx8cm的柱子，以一定浓度 的GSH10m1，一定pH的溶液上柱，依次用一定浓度盐酸分步洗脱，各洗脱液的用量为洗脱至没 有GSH流出为止的体积，收集各部洗脱液，用四氧咯吮法测定GSH的含量。 2 实验结果 2.1 GSH的粗提 我们采用3种方法对鲜酵母进行粗提。(1)乙醇萃取:适量的40%的乙醉加人5.778湿酵母 中，用玻璃棒搅拌均匀，使二者充分混合均匀，恒温35`C，抽提2小时，离心得到上清液31m(, 低温保存备用 (2)热水萃取:将适量蒸馏水加人湿酵母6.28g中，用玻璃棒搅拌均匀，在100cl 557 沸水浴5分钟后，取出迅速冷却至室温。离心后得到上清液27m1，低温保存备用。(3)热水抽 提:将6.5崛鲜酵母与适量蒸馏水及0.2m1醋酸混合均匀，90℃抽提3分钟，在冰箱内迅速冷却， 用2mol/L的盐酸调pH值到3.0，然后3000r/min离心，得到黄色澄明的鲜酵母抽提液38mla(4) 超声波提取:使用超声波破碎仪，在25度下破碎30mino 从图1中的结果表明，热水抽提与超声波抽提比较好，获得的GSH含量比较高，考虑到经 济因素，我们认为热水抽提结果更适宜。粗提后获得的GSH含量为平均 16.57mg/g菌体。 196.17mg/L发酵液。 舫 神 … ( 即 ︵ . 叫 、 卜 ‘ 拓 . 忍 飞 翻 ︸