绿茶对金黄色葡萄球菌的抑制试验.PDFVIP

一、目的要求 1. 了解绿茶对人体的功效与作用。 2. 了解绿茶中茶多酚对微生物中金黄色葡萄球菌抑菌 作用。 3. 掌握双层平板滤纸片法的抑菌试验。 二、实验材料 1. 菌种 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) 2. 用品和设备 电子秤，电炉，烧杯，玻棒，蒸馏水，纱布， 无菌培养皿，移液枪（1000 L ），无菌滤纸 片，镊子。 3. 5%绿茶汁制备 三、实验内容 绿茶对金黄色葡萄球菌的抑制实验 （一）实验原理 茶叶具有药理作用的主要成份是茶多酚、咖啡碱、 脂多糖、茶氨酸等。 绿茶中含茶多酚15%-20%，茶多酚具有抗衰老、预 防心血管疾病、提高免疫力、抗菌杀菌、消炎止泻等多 种功能。 采用滤纸片法和平板计数法观察绿茶汁对金黄色葡 萄球菌液的抑菌作用。 （二）实验步骤 1．滤纸片法观察绿茶抑菌效果 1.1 将琼脂培养基熔化倒平板。 1.2 吸取0.2 mL金黄色葡萄球菌液于LB半固体培养基中混匀， 立即倾注于琼脂培养基上摇匀，使上层培养基铺满平板。 1.3用无菌镊子将无菌滤纸片（直径5mm ）浸泡于5%绿茶汁中 浸湿，并贴于双层平板上，另将浸泡无菌生理盐水中滤纸片作 为对照。 1.4将贴好的滤纸片的平板倒置于37 oC培养箱内，培养24 h。 1.5观察记录抑菌圈的直径大小。（图1） （二）实验步骤 2 ．平板计数法分析绿茶抑菌效果 2.1 取两支无菌试管标记为1号和2号，分别加入3 mL金黄色葡 萄球菌菌悬液。 2.2 将1号试管中加入1 mL生理盐水，为对照组菌悬液；2号加 入1 mL 5%绿茶汁，为试验组菌悬液，分别混匀。 2.3 把两支试管放入37 ℃恒温摇床中振荡培养2 h。 2.4 将标有梯度稀释号的所用试管中加入4.5 mL无菌水，从1号 -1 试管中吸取0.5 mL菌悬液加入标号第一支试管中混匀，为10 -1 稀释液，再从10 稀释液中吸取0.5 mL加入第二支稀释试管中 -2 -3 -4 混匀，为10 稀释液，以此方法将菌悬液稀释至10 、10 ；同 -4 样的方法，将试验组菌悬液稀释至10 。 （二）实验步骤 2.5 分别吸取各稀释度样液1 mL于对应编号的培养皿中， 将牛肉膏蛋白胨培养基（约50℃）到入对应编号培养皿中 ，每皿约20 mL，立即混匀。 2.6 待凝固后倒置于37 oC培养箱培养1 d。 2.7计数培养皿中菌落数，选取菌落数在30-300CFU/皿计 算试验组和对照组菌浓度，观察对照组和实验组菌落数的 变化，并以试验组菌浓度为分子、对照组为分母计算抑菌 率，分析绿茶抑菌效果。 （三）实验结果 1．滤纸片法分析绿茶抑菌效果 观察抑菌圈的直径大小 （三）实验结果 2 ．平板计数法分析绿茶抑菌效果 观察菌落数的变化 （四）注意事项 1. 熬制绿茶汁时一定要用文火并要不断的加热水保持 体积不变。 2. 贴滤纸片时要一次性放好，不要挪动，以免影响实 验结果。 3. 金黄色葡萄球菌液于LB半固体培养基时温度不易高， 保持在45 ℃左右，避免菌失活。 4. 倒牛肉膏蛋白胨培养基时，温度应控制约50 ｏC时到 入培养皿中，并左右交换摇匀。 四、思考题 1. 绿茶对人体有哪些功效和作用？ 2. 通过实验解释绿茶为什么有抑菌作用？