2017-2018学年高中生物 DNA和蛋白质技术 5.2 多聚酶链式反应扩增DNA片段课件 新人教版选修.pptVIP

-*- 课题2　多聚酶链式反应扩增DNA片段 ◆ 全书优质试题随意编辑 ◆ 课堂教学流程完美展示 ◆ 独家研发错题组卷系统 -*- -*- 新知导学 答疑解惑 案例探究 当堂检测 新知导学 答疑解惑 案例探究 当堂检测 答疑解惑 案例探究 当堂检测 新知导学 案例探究 答疑解惑 当堂检测 新知导学 当堂检测 答疑解惑 案例探究 新知导学 课题2　多聚酶链式反应扩增DNA片段 二 一 三 一、PCR原理 二 一 三 二 一 三 二 一 三 二、PCR的反应过程 二 一 三 二 一 三 三、实验操作 二 一 三 探究点一 探究点二 问题导引 体内DNA复制与PCR反应有何异同? 在遗传病诊断、刑侦破案、古生物学等工作中,有时需要对样品中DNA进行测序、鉴定等,但有的样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究,因此常需要用PCR技术对采集到的DNA样本进行大量扩增。PCR技术是利用DNA半保留复制的原理,在微量离心管中进行DNA的复制(如下图),在很短的时间内,将DNA复制出上百万份拷贝。 探究点一 探究点二 (1)PCR技术中加热使DNA双链打开,这一步是打开氢键,称为变性。如果在细胞中则是在解旋酶的作用下使此键断裂。 (2)当温度降低至55 ℃时,引物在模板3端与模板结合,当温度又升至72 ℃时在DNA聚合酶的作用下,合成新的DNA链,最终合成2个DNA分子,此过程中原料是4种脱氧核苷酸,遵循的原则是碱基互补配对原则,需要的酶是耐高温的TaqDNA聚合酶。 (3)PCR技术的必要条件,除了模板、原料、酶以外,至少还需要三个条件,即:液体环境、适宜的温度和pH,前者靠PCR仪自动调控,后者由缓冲液维持。 探究点一 探究点二 归纳提升 体内DNA复制与PCR的比较 探究点一 探究点二 特别提醒PCR反应需可变的温度,而体内DNA复制需要稳定的温度。 探究点一 探究点二 问题导引 PCR反应一般经历多少次循环?每次循环有几个环节? 下图为PCR反应过程示意图,据图回答问题。 (1)PCR一般要经历三十多次循环,每次循环一般包括A变性、B复性和C延伸三步。 (2)第一轮的产物作为第二轮的模板参与反应,经过A、B、C三步进入下一轮循环。 探究点一 探究点二 (3)若下图为第一轮循环产生的产物,请绘出以a链和b链为模板经PCR扩增的产物。 答案: (4)假设PCR反应中只有1个DNA分子作模板,第一轮循环的产物2个子代DNA分子为N1,第二轮的产物4个子代DNA分子为N2,N1、N2中含有模板DNA链的DNA分子数量分别为2个、2个。若继续循环,该模板DNA分子经过30次循环后能形成230个DNA分子。 探究点一 探究点二 归纳提升 1.PCR扩增需要注意的问题 (1)DNA复制需要引物的原因:DNA聚合酶不能从头开始合成DNA,而只能从3端延伸DNA链。PCR中,引物长度通常为20~30个核苷酸。 (2)当PCR反应体系的温度冷却到50 ℃左右时,引物与模板结合,一般不需要考虑解开的两个DNA模板链的重新结合,原因是:①模板DNA链比引物长得多而且复杂得多,不易重新结合;②引物和模板之间的碰撞机会远远高于模板互补链之间的碰撞机会;③加入的引物的量足够大,而模板链数量少。 探究点一 探究点二 2.实验中DNA含量的测定 DNA在260 nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰,可以利用DNA的这一特点进行DNA含量的测定,具体方法如下。 ①稀释:2 μL PCR反应液,加入98 μL蒸馏水,即将样 品进行50倍稀释 　↓ ②对照调零:以蒸馏水作为空白对照,在波长260 nm 处,将紫外分光光度计的读数调节至零 　↓ ③测定:取DNA稀释液100 μL至比色杯中,测定260 nm 处的光吸收值 　↓ ④计算:DNA含量(μg/mL)=50×(260 nm的读数)× 稀释倍数 类型一 类型二 类型三 类型一　PCR反应与体内DNA复制的比较 【例1】 PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比较,下列相关叙述正确的是(　　) ①PCR过程需要的引物是人工合成的单链DNA或RNA ②PCR过程不需要DNA聚合酶 ③PCR过程中DNA的解旋不依靠解旋酶,而是通过对反应温度的控制来实现的 ④PCR过程中,DNA不需要解旋,直接以双链DNA为模板进行复制 A.③④ B.①③ C.①② D.②④ 类型一 类型二 类型三 解析:PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比,主要有两点不同:第一,PCR过程需要的引物是人工合成的单链DNA或RNA,其长度通常为20~30个核苷酸;第二,PCR过程中DNA的解旋不依靠解旋酶,而是通过对反应温度的控制来实现的。 答案:B 类型一 类型二 类型三 变式训练1 下列关于体内DNA复制和