耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因与毒力基因检测研究.docVIP

精品论文 参考文献 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因与毒力基因检测研究 湖南省龙山县人民医院 湖南湘西 416000 摘要：目的：研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药基因与毒力基因携带情况。方法：选取2014年1月至2014年12月期间我院收治患者临床检测标本中分离得到的45株金黄色葡萄球菌，采用聚合酶链式反应检测法测定金黄色葡萄球菌的耐药基因及毒力基因。结果：45株MRSA菌株中，对红霉素的耐药率为95.6%，四环素的耐药率为91.1%，对环丙沙星的耐药率为93.3%，对其他抗生素耐药率为100%；beta;-内酰胺类、四环素类、大环内酯、消毒剂类以及氨基糖苷类耐药基因阳性率分别为100%、91.1%、95.6%、46.7%、97.8%；毒力因子粘附素、酚溶调制肽PSM-mec型、杀白细胞素以及TSST-1基因阳性率分别为80.0%、88.9%、93.3%，0.0%。结论：对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药基因、毒力基因的检测有助于分析MRSA的致病机理，为临床治疗MRSA感染提供参考。 关键词：黄色葡萄球菌；耐药基因；毒力基因 金黄色葡萄球菌[1，2]是一种常见的病原菌，可引起多种严重感染。有研究表明，金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。于1959年应用于临床的甲氧西林是早期治疗金黄色葡萄球菌的有效抗生素，但是之后出现了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）[3，4]，并迅速感染全球，成为院内感染的重要病原菌之一。研究表明，MRSA导致感染的强度、感染部位与金黄色葡萄球菌的毒力因子有关[5]。为了探究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的毒力基因与耐药基因特性，本研究选取了45株MRSA，采用聚合酶链式反应检测法分析耐药基因、毒力基因携带状况，现报道如下。 1 资料与方法 1.1 菌株选取 选取我院2014年1月至2014年12月期间收治病人检测样本中分离得到的MRSA菌株共45例，其中痰液菌株32例，脓液菌株6例，血液菌株4例，尿液菌株3例。所选菌株均经过菌种鉴定，并进行药敏试验，并按照CLSI2011试验标准判定检测结果。 1.2 检测方法 利用蛋白酶K裂解法制备MRSA菌株的DNA样品，制备所用裂解液及缓冲液均采购自北京市克隆遗传技术研究所。采用聚合酶链式反应（PCR）检测MRSA的如下耐药基因：beta;-内酰胺类耐药基因、四环素耐药基因、大环内酯类耐药基因、消毒剂耐药基因以及氨基糖苷类耐药基因；检测MRSA的如下毒力基因：粘附素基因、酚溶调制肽PSM-mec型基因、杀白细胞素基因以及TSST-1基因等。所采用的PCR引物序列详见文献[6，7]。检测所用PCR扩增试剂盒、对照DNA等均采购自上海生物工程股份有限公司，具体操作过程严格按照试剂盒说明进行。 2 结果 2.1 药敏试验结果 45株MRSA菌株中，对红霉素的耐药率为95.6%，四环素的耐药率为91.1%，对环丙沙星的耐药率为93.3%，对其他抗生素耐药率为100%。详见表1。 3 讨论 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是在使用甲氧西林抗生素药物后产生的，具有明显的耐药性。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌相比普通金黄色葡萄球菌多出葡萄球菌盒状染色体，而不同的葡萄球菌盒状染色体均携带beta;-内酰胺类耐药基因，因而具有beta;-内酰胺类耐药性。此外beta;-内酰胺类耐药基因还具有转肽酶活性青霉素结合蛋白能力。研究表明[8]，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌常见的耐药基因包括beta;-内酰胺类耐药基因、四环素耐药基因、大环内酯类耐药基因、消毒剂耐药基因以及氨基糖苷类耐药基因，常见的毒力基因包括粘附素基因、酚溶调制肽PSM-mec型基因、杀白细胞素基因以及TSST-1基因。MRSA与普通金黄色葡萄球菌均有粘附素基因，而beta;-内酰胺类耐药基因则是金黄色葡萄球菌较为普遍的多肽类耐药基因，其具有溶解人体中性粒细胞，从而促进人体炎症反应恶化，导致感染程度加重[9]。有研究表明，酚溶调制肽PSM-mec型毒力基因除在MRSA菌种中携带，在表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌等其他类型葡萄球菌亦有携带，表明酚溶调制肽PSM-mec型毒力因子以在其他类型葡萄球菌传播[10]。而MRSA杀白细胞素毒力因子的高表达将加重MRSA感染程度，尤其是会加重肺部感染、皮肤感染的程度。 本研究通过分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药基因及毒力基因检测，45株菌株的药敏试验结果表明，耐甲氧金黄色葡萄球菌对红霉素的耐药率为95.6%，四环素的耐药率为91.1%，对环丙沙星的耐药率为93.3%，而对头孢西丁、头孢曲松、苯唑西林以及庆大霉素等抗生素的耐药率为100%。采用PCR检测技术分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的