布鲁氏菌分子技术.ppt

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2018-01-17 发布于江苏
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布鲁氏菌分子技术

布鲁氏菌李天森内容布鲁氏菌病是人畜共患的慢性传染病，也是《中华人民共和国传染病防疫法》规定的乙类传染病。布鲁氏菌概述本地流行株羊种043等试管凝集虎红平板试纸条 PCR 抑制剂 WB 信号通路本室防护布鲁氏菌基因缺失株构建构建自杀载体 1.确定基因例如：牛种布鲁氏菌2308株omp10基因首先到ncbi（/）查找牛种布鲁氏菌2308株全基因组序列和目的基因omp10的基因序列。 2.设计引物上臂上游与下臂下游加酶切位点。 3.扩增目的基因片段及融合 4.1卡那抗性替换需要将融合片段连接到pUC19k载体。得到pUC19k-omp10(同源臂)-kana载体 4.2无痕缺失将融合片段连接到pMD19-T载体，酶切之后连接到pGEM-7Zf+载体，同时将SacB基因连接到pGEM-7Zf+-omp10载体，作为负筛选标记。得到pGEM-7Zf+-omp10(同源臂)-SacB载体 5.电转化将构建成功的载体电转进入布鲁氏菌感受态中。 6.同源重组筛选 7.传代培养 1 2 15