抗原抗体反应及应用7.ppt

第七章 抗原抗体反应及应用;第一节 抗体的制备;一、抗血清的制备;2. 抗血清的纯化;抗血清的特性鉴定 检测参数：效价、亲和力和交叉反应 检测方法:免疫沉淀、ELISA和放射免疫 ① 效价（滴度）：在给定的条件下，结合一定量抗原的抗血清的稀释度（最大稀释倍数）。 抗血清经一系列稀释后与一定量的抗原反应，以能检测抗血清最大稀释倍数即为该抗血清的效价。 效价是一个抗体相对含量的半定量指标。;亲和力：表示抗血清与相应抗原的结合强度。 抗原抗体反应： ;;2. 细胞来源及选择原理;〖名 称〗：BALB/c小鼠;③缺陷型骨髓瘤细胞的特点：;④杂交瘤细胞的特点： 带有B细胞的全套基因。 在培养基中加入次黄嘌呤（H）和胸腺嘧啶（T），再加入氨基喋呤（A）后，能生长。 用HAT培养基筛选。因为只有脾细胞和骨髓瘤细胞形成的杂交瘤细胞能在HAT培养基中生长。;3.细胞杂交与选择培养;（3） 单克隆化;4.扩大生产;;;1;;;5. 应用;（2）蛋白质的提纯单克隆抗体是亲和层析中重要的配体。将单克隆抗体吸附在一个惰性的固相基质（如Speharose 2B、4B、6B等）上，并制备成层析柱。当样品流经层析柱时，待分离的抗原可与固相的单克隆抗体发生特异性结合，其余成分不能与之结合。将层析柱充分洗脱后，改变洗脱液的离子强度或pH，欲分离的抗原与抗体解离，收集洗脱液便可得到欲纯化的抗原。 （3） 肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术将针对某一肿瘤抗原的单克隆抗体与化疗药物或放疗物质连接，利用单克隆抗体的导向作用，将药物或放疗物质携带至靶器官，直接杀伤靶细胞，称为肿瘤导向治疗。 另外，将放射性标记物与单克隆抗体连接，注入患者体内可进行放射免疫显像，协助肿瘤的诊断。 ;三、基因工程抗体的制备;2.抗体基因文库;3.抗体基因的改造;第二节 抗原抗体反应原理;抗原与抗体结合的化学平衡;浓度;二、抗体与多价抗原结合的浓度带现象;沉淀反应曲线;抗体过量（无沉淀）;;第三节 常见免疫分析方法;一、免疫沉淀;;2. 凝胶扩散沉淀 ;;沉淀线形状的变化显示抗原间是否存在共同的抗原决定簇。;3.免疫电泳;;;二、免疫标记;标记免疫技术=;1.放射免疫分析法;直接法与竞争法;竞争法基本原理;放射活性;放射性同位素标记分析法示意图;;2.酶联免疫吸附试验（ELISA） ( enzyme linked immunosorbent assay);(3) 测试过程;用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。（酶标抗原抗体复合物的分离） 加入底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。（显色反应）;酶;(4) ELISA技术类型;;;①双抗体夹心法(直接夹心法）;特点： 非竞争结合反应 常用于抗原的检测 适用于分子中具有至少两个抗原决定簇的多价抗原，而不能用于小分子半抗原的检测 所用两种抗体分别针对同一个抗原分子的不同抗原决定簇 ;②间接法;;③捕获法（反向间接法）; ④直接法 用酶标记的抗原或抗体直接检测包被在酶标板上的抗体或抗原，其量与产物颜色成正比。;3、均相酶免疫吸附测定 ;酶放大免疫测定技术:（enzyme-multiplied immunoassay technique，EMIT）;⑤斑点酶免疫试验 (dot-ELISA);3. 免疫荧光技术;基本原理 利用荧光素标记抗体，使之在涂片上或组织切片上???标本中的待检抗原特异结合，采用高发光效率的点光源，透过滤色板发出一定波长的光，使结合在标本上的荧光素被激发而产生荧光，借助荧光显微镜观察底物片上荧光染色形态，来判断有无待检抗原或抗体。 ;;荧光免疫测定技术——时间分辨荧光免疫分析法;Eu;4.亲和标记的免疫分析;A蛋白;三、免疫定位分析;1.免疫荧光定位分析;;;2.酶标记免疫定位;（2）免疫印迹法（immunoblottingtest，IBT）;免疫印迹法原理示意图 ;3.免疫电子显微镜（IEM）技术;四、抗原抗体反应的其他应用;抗体+琼脂糖;2.生物感应器;组成： 生物受体（抗体） 转导体 电子放大处理器