食品与细胞工程.ppt

5) 细胞培养溶液 平衡盐水（BSS）： Hanks 液和Earle液是常用的BSS基础溶液。 pH调整液： NaHCO3溶液、HEPES溶液（二羟乙基哌嗪乙烷磺酸） 细胞消化液: 胰蛋白酶溶液．EDTA溶液．胶原酶溶液 抗生素溶液： 1) 青、链霉素:每毫升培养液含100U青霉素和100ug链霉素. 2) 卡那霉素：终浓度为50ug/ml培养液。 3）制霉菌素：浓度25U/ml，小瓶分装，每瓶一次用完。 6)、无污染环境 　　培养环境无毒和无菌是保证细胞生存的首要条件。当细胞放置于体外培养时，与体内相比细胞丢失了对微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身代谢物质积累等，可导致细胞死亡。因此在进行培养中，保持细胞生存环境无污染、代谢物及时清除等，是维持细胞生存的基本条件。 四 细胞培养设施 1、实验室设计　　细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响，要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。 细胞培养室的设计实施原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于一室，而洗刷消毒在另一室。 细胞培养实验室 1.准备室 2.缓冲室 准备室 风淋 3.培养室 培养室 专用于组织细胞培养的空间，应包括更衣间、缓冲间、操作间。 内设超净工作台、培养箱等细胞培养的必要设备，应具备紫外消毒、通风及温控设施。 操作间放置净化工作台及二氧化碳培养箱、离心机及倒置显微镜等。 缓冲间可放置电冰箱、冷藏器及消毒好的无菌物品等 风淋室： 　　 风淋室是生物洁净室的理想配套设备，它不仅可以清除人体和物品表面附着的尘埃，减少带入洁净室的灰尘量，而且兼有气闸室的功能，可防止非洁净空气的侵入。风淋室的板壁采用轻质隔热夹芯钢板，吹淋板采用进口不锈钢制作，吹淋口方向可调，风淋时间可在30-99秒间的调整。风淋室可以配合加热器，冬天可以加热，温度可调，一般控制温度在30-35℃较为适宜。  超净工作台 也称净化工作台，分为侧流式、直流式和外流式三大类。 CO2培养箱　 　哺乳动物离体细胞培养和体内细胞一样,需要在恒足温度下才能生存,温差变化一般不应超过0.5度，因此培养箱对温度应具有较高灵敏度。 CO2培养箱的优点在于能恒定地供应一定量的CO2,一般5%即可维持培养液pH值稳定。 　 　 　　 冰箱 细胞培养的冰箱应特别注意清洁，防止污染。 水纯化装置　　细胞培养对水的质量要求较高。一般需要使用重蒸或三蒸水配置各种培养用液。 过滤装置 各种培养用液只能用过滤的方法进行除菌消毒处理。微滤膜滤器是目前应用最广泛的过滤装置。 细胞冷冻贮存器 　　细胞冷冻贮存具有经济、省力和较好保持细胞生物学特性的优点，目前各实验室主要使用液氮容器贮存细胞。 培养器皿　　　 培养器皿包括各种规格的玻璃、塑料培养瓶，培养皿，吸管，离心管等。 无菌操作的要领 　　由于体外培养的细胞缺乏机体抗感染功能，所以在一切操作中要努力作到最大限度的无菌，防止污染。 超净工作台消毒　　打开紫外线杀菌灯照射消毒20～30分钟，然后关闭紫外灯，打开风机，流入的空气是经过除菌板过滤的空气，工作台可保持无菌环境。 洗手　 操作时因整个前臂伸入工作台内，所以洗手一定要刷洗到肘部，然后用0.2%新洁尔灭或75%的酒精棉球擦拭。? 火焰消毒 　 所使用物品均应经过烧灼，所用瓶口等开启或封盖时均需迅速旋转过火焰进行消毒。注意金属器械不能在火焰上烧灼时间过长。　 烧过的用具均要待冷却后再接触组织细胞。　 　 吸取营养液后的吸管不能再经火焰烧灼,否则会烧焦形成炭膜,再用时会将有害物质带入培养液。　 　　 合理布局　 右手使用方便的用品放右侧，左手使用方便的用品放左侧。　 　 酒精灯置于中央，打开的培养液、培养瓶等应保持斜立或平放（瓶口长时间开口直立,易增加落菌机会）。　 吸取各种用液应分别使用吸管，不能混用。 * L/O/G/O 第三章食品与细胞工程 本章主要内容 细胞工程概述 动物细胞工程 植物细胞工程 细胞融合技术 4 1 2 3 细胞杂交瘤技术与单克隆抗体 5 一 细胞工程概述 1.1 定义：细胞工程是以生物细胞或组织为研究对象，利用细胞生物学、发育生物学、遗传学和分子生物学的理论和方法，应用工程学的步骤，按照预定目标和设计有计划地改变细胞的遗传物质并使之增殖，从而生产有用的细胞生物产品或获得新型生物品种的一门综合性科学技术。 目的：获得新性状、新个体、新物质 1.2 细胞工程的研究范畴 动细胞培养 植