蜘蛛丝促凝血功能的实验观察.docVIP

精品论文 参考文献 蜘蛛丝促凝血功能的实验观察 中南大学湘雅医学院 湖南长沙 410000 蜘蛛丝是蜘蛛吐出后遇到空气即变硬的一种骨蛋白纤维丝，形状精细，质地坚韧，富有弹性。在我国民间，蜘蛛丝作为一种专方药材已有很长的历史，主要用于外伤止血，伤口包扎，具有良好的止血、杀菌消炎的作用。《本草纲目》在虫部第四十卷记载，可“治出血不止，蛛丝散方”，《医心方》第十八卷记载“又方，以蛛蛛膜贴之，血即止”。可见，蜘蛛丝止血，确有其效果。但迄今为止，医学上关于蜘蛛丝的研究多限于其作为手术缝合线的应用，未见有关其促凝止血作用的深入研究报道，因此，就蜘蛛丝促凝止血作用做初步实验观察，以期初步了解其功能机理。 一、材料 1，材料：蜘蛛丝（粉）、蚕丝粉、人体全血、流式离心机。美国Beckmancoulter公司生产的全自动凝血分析仪ACL TOP和美国Becton-Dick-inson（BD）公司生产的FACSCalibur型流式细胞仪。 2，试剂：①美国Beckmancouher公司ACL系列凝血仪配套试剂：凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血酶原时间（Am）、凝血酶时间（TT）、纤维蛋白原（FIB-clauss）测定为凝固法，D-二聚体（D-dimer）~J定为免疫比浊法，抗凝血酶-Ⅲ（AT-m）测定为发色底物法。②美国BD公司生产：血小板激活复合物（PAC）-1为异硫氰酸荧光素（FITC）标记的抗人血小板活化GPⅡb／Ⅲa．CD62p为藻红蛋白（PE）标记的抗人CD62p抗体。CD61 PerCP为Peri-dinin chlorophyll protein（PerCP）标记的血小板糖蛋白酶的单克隆抗体。 3，仪器：显微镜、37?C恒温箱、超净工作台 4，耗材：一次性针头，玻片， 二、实验方法 1，蜘蛛丝粉末的制备：购买蜘蛛丝，去掉其中杂物，以水漂洗，用蒸馏水漂洗数次，放置在捣碎机内充分粉碎，过滤，烘干（40deg;以下）后加细砂研磨，再加入蒸馏水，静置数分钟后等沉淀聚集，上清液过滤去掉，留下沉淀，风干即得。 2，PT获得：8%构椽酸钠（1：9）抗凝全血30mL，取1mL与等量的固定剂（2mmol/L戊二醛3mmol/L 叠氮钠-PBs，Ph7.4）混合，室温作用30min；余血800r/min离心10min，取上层富含血小板血浆（PRP），以台氏液（138mmol/LNaCl，29mmol/LKCl，0.4mmol/LNaH2PO4，1.8mmon/LCaCl2，12mmol/LNaH2PO4，5.5moml/L葡萄糖，pH7.4）洗涤2次，再以台氏液悬浮，取0.5ml血小板悬液加入终浓度为5微mol/ L LADP（sing），作用5min，同上固定；另取0.5ml血小板悬液加入终浓度为500U/L 凝血酶（Sigma），37?C，不搅拌，作用3min，同上固定，即分别为固定的全血ADP戍凝血酶活化的血小板。 3，分组：取六只相同的洁净试管，编号1-6号，1-3组为第一大组，4-6组为第二大组。按如下表格要求分别向1-6号试管加入不同试剂，混合均匀置于37?C恒温箱中放置。 该图为一号试管刚刚完全凝固时，三只试管的凝血情况。可看出当1号试管完全凝集时，2、3号试管凝集程度低。 在第二大组中，各试管涂片镜下血小板凝集情况为： 4号试管涂片镜下观察到大部分PT凝集成了粒状或块状； 由以上实验结果可知：蜘蛛丝（粉）有显著的凝血止血作用，并且有其独特的（不同于一般蛋白，如蚕丝）促进凝血止血和促进PT的凝集的机制。 四、讨论 1，蜘蛛丝民间用于刀刃止血，包扎伤口，历史悠久。实验显示，由于蜘蛛丝的粘性，只要在血液中加入一小段，就可以加快凝血速度。本实验是对其止血机制的研究，在一定程度上解释了其用于日常止血的原理，同时也提供了一种用于止血的新物质，并且对于扩大其用途，进一步更好得利用这种物质的价值提供了新的思路。 2，蜘蛛丝可用在眼科、神经科等精细手术中。实验显示，蜘蛛丝具有一定的促进伤口痊愈和凝血的功能，将使其在伤口包覆材料方面获得广泛的应用，如脉管伤口修复材料，止血敷料、止血片和缝合线等。蜘蛛丝的软韧性也具有一定的临床价值，可以减少丝线突然断裂的可能性，细小的蜘蛛丝可运用于改善缝合线等，适合于眼科、神经科等精细的手术。 3，蜘蛛丝促凝血功能可从对血小板的激活、在内外源性凝血途径的作用以及在内皮细胞修复（创伤修复）三方面进行探究。蜘蛛丝的成分较简单，已有相关研究人员做了检测。在近