疟原虫的制片技术幻灯片课件.pptVIP

影响染色效果的因素 血片染色好坏除与玻片清洁度、血片制作质量和染色技术等有关外，还受到以下因素的影响： （1）染液稀释后使用时间 必须现用现稀释，当时使用，一般在0.5h内染色力最强。吉氏和瑞氏染液的主要成份是美蓝、伊红和由美蓝氧化产生的天青，三者能在甲醇中溶解，但在水溶液中伊红遇到美蓝和天青即产生沉淀，从而失去染色能力。 （2）染液的稀释浓度 染液的浓度要适当。染液的浓度高，着色就快而深，疟原虫寄生红细胞的薛氏点粗大显著，但颜色常偏碱；染液浓度低则染色时间久，颜色偏酸，薛氏点不明显或消失。 影响染色效果的因素 （3）染色时间 染色时间长染色效果好，反之较差。染色时间应根据染液的稀释浓度和气温而适当增减。室温高则着色快，染色时间可略缩短，气温低可适当延长。 （4）染色用水 染液的稀释用水和染色后冲洗用水应选择pH7.0-7.2缓冲液，也可以使用新鲜的蒸馏水或过滤的冷开水。 （5）冲洗方法 应沿玻片或染色缸边缘加水使染液表面一层溢出，并轻轻冲洗，以免染液色素颗粒附着于血膜。 疟原虫的制片技术 . 内 容 （一）血片制作 （二）染 色 所需设备 载玻片：清洁无油污，以免血膜受污染或脱落 推 片：边缘光滑，用完后及时清洗，以免影响下次使用 微量采血吸管：20ul，取血时可供参考 胶 头：与微量采血吸管配套，注意不要吸进血液 取血所用的设备：75%酒精棉球、一次性采血针、抗凝管等 记号笔：写标签 水、纸巾：用于清洗、拭干推片 样本要求 末梢全血：指尖、耳垂末梢全血，婴幼儿可取拇趾或足跟部全血。现场取血现场制片。 静脉全血：采用抗凝管采血。最好取血后立即制片，如果血液放置时间过长会影响镜下形态。冷冻后的血液不能用于制片。 骨 髓：临床上可用于确诊恶性疟感染，可查到恶性疟大滋养体和裂殖体。 注 意：（1）用抗疟药之前取血（用药后镜检结果往往是阴性）；（2）取血后应尽快制片（血细胞和疟原虫的形态保存完好）。 血膜的种类 用于检查疟原虫的血膜用两种： 一种是将血液涂成薄膜状，称为薄血膜； 一种是将血液涂成圆盘状，称为厚血膜。 要求：一张玻片上同时制作厚、薄两种血膜！！ 血膜的位置 标准血片： 每张玻片涂厚、薄血膜各1个 方 法： 将载玻片平均分为6等份：第1、2格用于贴标签；厚血膜涂在第3格中央；薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部 外 观： 血片自左向右依次为薄-厚-标签 标 签 6 5 4 3 2 1 薄 血 膜 厚 血 膜 标准的疟原虫血片 内 容 （一）血片制作 （二）染 色 染液的种类 目前临床上应用最广泛的是瑞氏染液和吉氏染液。 我们推荐用吉氏染液，它具有方便，染色效果稳定，便于长期保存的优点。 瑞氏染色，染色时间短，但染色效果不如吉氏稳定，主要在门诊量大的门诊实验室使用。 染色前的处理 无论用吉氏染液还是瑞（吉）氏染液，染色前均需要对薄血膜进行固定，对厚血膜进行溶血处理。 薄血膜固定：将血片薄血膜朝下，呈45°倾斜，用吸管吸取一定量的甲醇或无水乙醇进行固定。 厚血膜溶血：将清水滴加于厚血膜上或将厚血膜向下插入水槽中，待厚血膜表面呈白色即可。 注 意：（1）固定薄血膜时甲醇一定不要碰到厚血膜；（2）厚血膜溶血后需要晾干再进行染色，否则厚血膜很容易脱落。 注 意：母液的稀释用水尽量选用pH为7.0-7.2的缓冲液。 原 因：当染液的pH值为7.0-7.2时染色效果较好，疟原虫的胞浆被染成蓝色，疟原虫的核被染成红色。 染液偏酸时，红细胞和疟原虫的核染成鲜红色，而疟原虫的胞浆着色较差。 染液偏碱时，红细胞被染成紫蓝色，不易观察。 吉氏染液的染色方法 染色前的处理： 血膜干燥后,先用甲醇或无水乙醇固定薄血膜,再用清水对厚血膜溶脱血红蛋白（新制作的血片可省略这一步骤，因染液中含较高浓度的水，在染色过程中进行溶血），然后再进行染色。 染液的配制： 每1ml缓冲液或蒸馏水，加吉氏母液2-3滴；或将母液和缓冲液按照1:9的比例混合。 染色方法： 每张血片约需要染液2ml，将染液混合均匀，滴加于血膜上并覆盖整个血膜，染色15-20min。然后用清水轻轻将染液冲洗干净，晾干后镜检。 瑞（吉）氏染液的染色方法 染色前的处理： 血膜干燥后,先用清水对厚血膜溶脱血红蛋白，待厚血膜晾干后，直接进行染色。（这种染色方法省略了固定薄血膜这一步骤，因染液中含较高浓度的甲醇，在染色过程中对薄血膜进行固定）。 染液的配制和染色方法： 根据说明书操作。 染色注意事项 （1）滴加染液时吸管不要碰到血膜，否则容易出现划痕； （2）滴加染液时不要出现气泡，否则影响着色； （3）勿直接倾