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医学论文-远志种质资源遗传多样性随机扩增多态性DNA分析 【摘要】? 目的用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术分析远志Polygala tenuifolia Willd.及卵叶远志P.sibirica L.的遗传多样性。方法反应总体积25 μl，内含10×PCR buffer 2.5 μl,dNTPs 2.0 μl,MgCl2 2.0 μl,引物1.0 μl,模板2 ng,Taq酶0.3 μl。扩增程序为：94℃预变性4 min，然后进行45循环：94℃变性15 s，36℃复性1 min，72℃延伸1.3 min，循环结束后72℃延伸4 min。结果10个引物共检测到154个位点，平均每个引物扩增9.24条带，其中148条带表现为多态性，占总带数的94.3％；距离系数为24时，11个样品明显聚为远志居群和卵叶远志居群两类。结论远志与卵叶远志具有丰富的遗传多样性，遗传聚类与其地理分布有一定的相关性。 【关键词】? 远志；卵叶远志；遗传多样性；随机扩增多态性DNA 　　Abstract:ObjectiveTo analyze genetic diversity of Polygala tenuifolia Willd and P. sibirica L. with RAPD-PCR.MethodsThe RAPD-PCR reaction system was constructed with 2.5 μl 10×PCR buffer, 2.0 μl dNTPs, 2.0 μl MgCl2, 1.0 μl primer, 2 ng template and 0.3 μl Taq with total reaction volume of 25 μl. PCR amplifying sequences were as follows:? Initial denaturating for 4 min at 94℃,then denaturating for 15 s at 94℃, annealing for 1 min at 36℃ and extension for 1.3 min at 72℃. After 45 times cycle, keeping extension for 4 min. Results154 polymorphism strands were detected with 10 primers, among which 148 strands were of polymorphism. Cluster analysis indicated that all samples could be clustered into two populations with distance coefficient of 24. ConclusionPolygala tenuifolia Willd and P. sibirica L. have rich genetic diversity. The genetic clustering has some relevance with geographical distribution of P. tenuifolia Willd and P. sibirica L. 　　Key words:Polygala tenuifolia Willd.;? Polygala sibirica L. ;?? Genetic diversity; RAPD PCR ??? 远志来源于远志科（Polygalaceae）植物远志Polygala tenuifolia willd或卵叶远志P.sibirica L.的干燥根，临床应用广泛。近年来由于过度采挖，导致野生药材资源骤减，二者已被收入《国家重点保护野生药材物种名录》，保护级别为Ⅲ级。现在在山西、陕西等地已有大面积栽培，但缺乏栽培的规范化研究以及栽培与野生药材种质资源遗传多样性的研究，这不利于远志药材优良品种的选育和种质资源的评价。目前在国内还未见到远志遗传多样性研究的报道。??? 　　随机扩增多态性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA RAPD)在药用植物遗传多样性研究方面，已成功用于多种药用植物的DNA指纹图谱构建、真伪鉴定、亲缘关系、种质遗传多样性和药材道地性研究上［1］。本文通过对远志P. tenuifolia Willd.及卵叶远志P.sibirica L. 种质资源RAPD研究分析，探讨远志的遗传多样性，为远志DNA指纹图谱的构建、种质资源遗传多样性研究以及育种奠定基础。 　　1? 仪器与材料 　　1.1 仪器 　　HB-100型恒温金属浴（杭州博日科技有限公司）；Sarto