选修3 基因工程的原理和技术.ppt

基因工程的原理： 基因重组。 基因工程的目标： 让人们感兴趣的基因在宿主细胞中稳定和高效表达。 步骤2、重组DNA分子的形成： (03理综）采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因的做法正确的是：( ) ①将毒素蛋白注射到棉受精卵中 ②将编码毒素蛋白的DNA序列，注射到棉受精卵中 ③将编码毒素蛋白的DNA序列，与质粒重组，导入细菌，用该细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养 ④将编码毒素蛋白的DNA序列，与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵 A.①② B.②③ C .③④ D.④① 步骤5、目的基因的表达 思考： 干扰素是一种抗病毒药物，其化学本 质是蛋白质，假如现在要用大肠杆菌 来生产抗病毒干扰素，如何操作？ * 基因工程的原理和技术 基因工程的基本操作步骤： 1）获得目的基因； 2）形成重组DNA分子； 3）将重组DNA分子导入受体细胞； 4）筛选含有目的基因的受体细胞； 5）目的基因的表达。 步骤1：获得目的基因 目的基因：是人们所需要转移或改造的基因 如人的胰岛素基因、干扰素基因、白细胞介素基因、植物的抗病基因、抗虫基因、抗除草剂基因、种子贮藏蛋白的基因等。 获得目的基因的方法： 已知序列 未知序列 化学方法合成 利用PCR技术扩增 从基因文库获得 基因文库：用重组DNA技术将某种生物细胞的总DNA或染色体DNA的所有片断随机地连接到基因载体上，然后转移到适当的宿主细胞中，通过细胞增殖而构成各个片段的无性繁殖系(克隆)，在制备的克隆数目多到可以把某种生物的全部基因都包含在内的情况下，这一组克隆的总体就被称为某种生物的基因文库。同一定义也适用于某种生物的线粒体DNA或叶绿体DNA的基因文库。 　 基因库是指某一生物群体中的全部基因。 基因克隆是只包含某些特定基因或DNA片段的克隆。 基因文库中包含着为数众多的克隆，建成后可供随时选取其中任何一个基因克隆之用。 3）从基因文库中获取目的基因： 基因文库: 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库(gene library) 基因组文库: 基因文库中包含了一种生物所有的基因,这种基因文库叫做基因组文库. 部分基因文库: 基因文库中包含了一种生物的一部分基因,这种基因文库叫做部分基因文库. 质粒 DNA分子 同种限制酶 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） GAATTCCGTAGAATTCGGATT CTTCATGAATTCCCTAA GAAGTACTTAAGGGATT CTTAAGGCATCTTAAGCCTAA CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG 思考： 目的基因、运载体质粒经DNA连接酶处理，可能有几种产物？ 1、目的基因与目的基因结合； 2、质粒与质粒结合； 3、目的基因与质粒结合。 (08海南) 图为某种质粒表达载体 简图，小箭头所指分别为限制性 内切酶EcoRI、BamHI的酶切位 点，ampR为青霉素抗性基因， tctR为四环素抗性基因，P为启 动因子，T为终止子，ori为复制 原点。已知目的基因的两端分别 有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。 （1）将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有 三种。 目的基因—载体连接物 载体--载体连接物 目的基因--目的基因连接物 （2）用上述3种连接产物与 无任何抗药性的原核宿主细胞 接种到含四环的培养基中，能 生长的原核宿主细胞所含有的 连接产物是 （4）在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶时 。 载体--载体连接物； 目的基因--载体连接、 载体--载体连接物 EcoRI和BamHI （1）常用的受体细胞： 大肠杆菌、 枯草杆菌、 土壤农杆菌、 酵母菌、 动植物细胞等。 步骤3、将目的基因导入受体细胞 （2）导入方法： （3）导入过程： 受体细胞：细菌 CaCL2 细胞壁的通透性增大 重组质粒进入受体细胞 目的基因随受体细胞的繁殖而复制 将目的基因导入受体