大花君子兰ISSR-PCR反应体系的建立与优化 Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System in Clivia miniata.pdfVIP
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大花君子兰ISSR-PCR反应体系的建立与优化 Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System in Clivia miniata
吉林农业大学学报2010,32(2):167~171,176 http://xuebao.jtau.edu.cn
JournalJilin
of AgriculturalUniversity
SSR—PC
大花君子兰I R反应体系的建立与优
化。
庞 赫t,郭太君r,胡志军2,潘肃s
1.吉林农业大学园艺学院,长春130118;2.长春市幸福乡红嘴子村君子兰基地,长春130000;
3.集安市人参特产业办公室,集安134200
摘 要:以大花君子兰为材料研究了PCR反应体系的主要成分及退火温度对君子兰ISSR扩增结果的影响,
并对影响PCR反应体系的主要成分及退火温度进行筛选和优化,确立了适合君子兰ISSR—PCR分析的最佳
反应体系:在20ttL的反应体系中,M92+为2.0mmol/L,模板DNA用量为50 U,dNTPs浓度为
ng/肛L,枷酶o.4
0.15
mmol/L,引物浓度为0.4mmoL/L。筛选出了13个适宜君子兰遗传分析的ISSR引物,确定最适宜退火温
度为52—56℃。
关键词:君子兰;ISSR;反应体系;优化
中图分类号:S682.13 文献标识码:A 文章编号:10130.5684(2010)02.0167.05
Establishmentand ofISSR—-PCRReaction in
Optimization System
C住v/aminiata
PANG Su3
Hel,GUOTai.junl,HUZhi.jun2,PAN
1
Horticulture,Jilin 1301 W—
1.Collegeof AgriculturalUniversity,Changchun8,China;2.Hongzuizi
CliviaBase 130000,China;3.五’an
lage of尼,l咖TownofChangchunCity,Changchun GinsengSpe—
cial 7an
IndustryOf-rice,Ji134200,China
Abstract:Thefactors the ofC//v/a(Cliviaminia.
affecting sequence
ISSR(inter-simplerepeat)result
ta)were DNA and
studied.ByadjustingM矿+,dNTPs,primer,raqpolymeraseannealingtemperature
were ISSR—PCRreactionconditionsforCliviaminiataweredeterminedasfol—
optimized.卟eoptimal
lows,in20 PCRreaction mmol/L
gL system,2.0 M酽+,50 DNA,0.4
ng/止template U砌DNA
mmol/L ISSR thatare for
dNTP
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