大花君子兰ISSR-PCR反应体系的建立与优化 Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System in Clivia miniata.pdfVIP

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大花君子兰ISSR-PCR反应体系的建立与优化 Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System in Clivia miniata

吉林农业大学学报2010,32(2):167~171,176 http://xuebao.jtau.edu.cn JournalJilin of AgriculturalUniversity SSR—PC 大花君子兰I R反应体系的建立与优 化。 庞 赫t,郭太君r,胡志军2,潘肃s 1.吉林农业大学园艺学院,长春130118;2.长春市幸福乡红嘴子村君子兰基地,长春130000; 3.集安市人参特产业办公室,集安134200 摘 要:以大花君子兰为材料研究了PCR反应体系的主要成分及退火温度对君子兰ISSR扩增结果的影响, 并对影响PCR反应体系的主要成分及退火温度进行筛选和优化,确立了适合君子兰ISSR—PCR分析的最佳 反应体系:在20ttL的反应体系中,M92+为2.0mmol/L,模板DNA用量为50 U,dNTPs浓度为 ng/肛L,枷酶o.4 0.15 mmol/L,引物浓度为0.4mmoL/L。筛选出了13个适宜君子兰遗传分析的ISSR引物,确定最适宜退火温 度为52—56℃。 关键词:君子兰;ISSR;反应体系;优化 中图分类号:S682.13 文献标识码:A 文章编号:10130.5684(2010)02.0167.05 Establishmentand ofISSR—-PCRReaction in Optimization System C住v/aminiata PANG Su3 Hel,GUOTai.junl,HUZhi.jun2,PAN 1 Horticulture,Jilin 1301 W— 1.Collegeof AgriculturalUniversity,Changchun8,China;2.Hongzuizi CliviaBase 130000,China;3.五’an lage of尼,l咖TownofChangchunCity,Changchun GinsengSpe— cial 7an IndustryOf-rice,Ji134200,China Abstract:Thefactors the ofC//v/a(Cliviaminia. affecting sequence ISSR(inter-simplerepeat)result ta)were DNA and studied.ByadjustingM矿+,dNTPs,primer,raqpolymeraseannealingtemperature were ISSR—PCRreactionconditionsforCliviaminiataweredeterminedasfol— optimized.卟eoptimal lows,in20 PCRreaction mmol/L gL system,2.0 M酽+,50 DNA,0.4 ng/止template U砌DNA mmol/L ISSR thatare for dNTP

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