PCR引物设计及相关软件使用讲解.pptVIP

心肌特异性表达双顺反子载体的构建 PMYL2 EcoRI pIRESneo－2 质粒克隆扩增 MYL2序列查询及 启动子功能分析 不加酶切位点引物设计 基因组DNA制备 高保真PCR Cloning 大量纯化的MYL2 promoter片段 酶切获得无promoter 线性质粒载体片段 DNA　Ligation Reaction 转入DH5a Colony Screening PCR Identification MYL2promoter pIRESneo pEGFP-c3 质粒克隆扩增 酶切获取MYL2promoter Plasmid vector开环分子 酶切获得EGFP片段 酶切及凝胶电泳鉴定及回收 环状DNA分子 DNA　Ligation Reaction 环状DNA分子 转入DH5a Colony Screening PCR Identification rat原代胚胎心肌细胞培养及冻存 MYL2promoter　pIRES/neo/EGFP 心肌细胞 脂质体 荧光鉴定 rat心肌细胞特异表达EGFP 无绿色荧光蛋白表达 达到目的 两端不含酶切位点的 MYL2/prmoter片段 5端含酶切位点的引物 PCR 两端含酶切位点 MYL2/prmoter片段 TA克隆 Strategy of Construct MYL2序列查询及分析 PCR引物设计及相关软件使