shbg基因启动子(taaaa)n多态性与河南汉族人群男性不育的相关性分析word论文.docxVIP

区微缺失与生精障碍有重要关系。基于这一结论，如欲研究基因多态性与男性不育的相关关系，须先排除Y染色体AZF区微缺失的影响。L.Lazaros等对希腊人群进行研究发现雄激素受体基因的(CAG)n和SHBG（Sexhormonebindingglobulin,SHBG）基因的(TAAAA)n的重复数目在精子的发生中起着很大的作用，并进一步影响了精子的存活数以及存活质量。Mohammad RezaSafarinejad等研究发现SHBG基因与男性少弱精症有关。有研究在人类肝母细胞瘤细胞中进行体外瞬时转染试验发现携带较长重复等位基因(TAAAA) n的个体SHBG水平显著低于携带较短重复等位基因的个体，说明SHBG 启动子的转录活性可能与(TAAAA) n重复数有关。Cousin[40] [13]等人的研究指出，在法国多毛女性人群中，含有6 个的患者与含有9 个的患者相比，其血清的SHBG水平较高，而含有8个的患者其血清的SHBG水平位于前两者之间。Vanbillemont等也进行了研究，得出结论携带6 次（TAAAA）n重复数的男性血清SHBG浓度比未携带者血清中SHBG的浓度高，并且指出纯合子比杂合子拥有更高的血清SHBG水平。在2007年Ferk等人经过大量研究也得出相似的结论：无论是多囊卵巢综合征患者还是健康成年女性，凡携带长等位基因（TAAAA）n的个体都表现出较低的SHBG水平。近年来许多研究表明，SHBG水平和男性不育有相关性。Wood等研究发现，不同长度（TAAAA）重复等位基因携带者的SHBG水平不同，继而影响男性精子发生和精液质量；ErikssonAL等把（TAAAA）重复数作为连续参数进行分析，研究表明在青年及老年男性中，（TAAAA）等位基因重复数和男性SHBG水平间存在相关性；2008年L.Lazaros等人报道指出SHBG基因多态性与男性精液质量有关。2010年RezaSafarinejad等人发现，SHBG基因（TAAAA）n多态性和Asp327Asn多态性与循环血液中SHBG的浓度及自发性男性不育有相关关系。而关于SHBG 基因启动子中（TAAAA）n重复多态性与男性不育的相关性研究国内未见报道。故本课题拟对SHBG 基因启动子（TAAAA）n 多态性进行研究，分析其多态性与河南汉族人群男性不育是否存在相关关系。首先本课题为研究对象进行Y 染色体AZF区域微缺失检测，采用多重聚合酶链式反应（Mutiplex PolymerasechainreactionMutiplexPCR）技术，以AZF微缺失作为排除标准，对纳入的研究对象利用变性聚丙烯酰氨凝胶电泳技术对河南汉族人群SHBG 基因的启动子（TAAAA）n多态性进行相关分析，拟找出其多态性在河南汉族人群中的分布II情况，进而得出其与男性不育的相关性，能更好的为男性不育的临床检测与治疗提供准确可靠的理论依据。研究对象：1．病例组采集自2013年1月—2013年6月因不孕不育问题来郑州大学第一附属医院生殖中心及检验科门诊就诊的288 例患者，年龄在22-45 岁（平均年龄32.4±6.4 岁）的男性。经过正规检查，排除肝脏肾脏疾病、慢性病如糖尿病高血压、睾丸因素疾病、染色体异常及缺失、内分泌系统疾病、生殖器相关疾病等病症以及服用抗肿瘤药物等情况,要求患者均经过至少两次精液常规检查，并且是按照标准化操作规程进行的,经确诊为无精子或少精子病的患者作为研究对象(精子密度＜20×106/mL)。所有受试者均为河南地区汉族人，且同意并已签署知情同意书。2．对照组随机抽取正常生育至少一个孩子并且身体健康无肝肾、糖尿病、高血压等的男性血液样本259例做为正常对照组，年龄在24-45岁（平均年龄32.8±6.7 岁），对象均为河南地区汉族人，且均已签署知情同意书。另以无菌双蒸水作为空白对照。研究方法采用常规经典的酚-氯仿法，分别从病例组的血液和对照组的血液中提取DNA，PCR扩增目的片段，进行Y染色体微缺失检测，再用6%的聚丙烯酰胺凝胶电泳对无缺失样本的目的片段进行SHBG 基因启动子（TAAAA）n基因型的检测，观察并记录分析。统计学处理III采用χ2检验和独立样本ｔ检验，比较病例组和对照组由于基因型、等位基因频率等相关因素在其中的分布差异性而男性不育的相关危险度则采用比值比(oddsratio,OR)及其95%可信区间(confidenceinterval，CI)来表示并严格控制其他干扰因素因素对结果的影响。使用HWE软件检验Hardy-Weinberg平衡对于对照组和病例组的基因型分布是否足以用样本代表总体。所有统计检验均为双侧概率检验,概率以P＜0.05作为显著性差异指标。统计软件为SPSS17.0和HWE1.20。结果：1．病例组288 例中检测出35 例Y染色