白花蛇舌草对人视网膜血管内皮细胞增殖及vegf表达影响word论文.docxVIP

白花蛇舌草对人视网膜血管内皮细胞增殖及VEGF表达的影响硕士研究生：向文雯导师：彭辉灿教授中文摘要目的通过研究高糖环境下白花蛇草注射液（Hedyotisdiffusainjection，HDI）对人视网膜血管内皮细胞(Retinalcapillaryendothelialcell,HRCECs)的增殖作用及其对VEGF表达影响，来探讨白花蛇舌草（Hedyotisdiffusawild，HDW）抑制新生血管形成（neovascularization，NV）的作用机制，为临床医治糖尿病视网膜病变（Diabetic retinopathy，DR)提供新途径。方法体外培养HRCECs，并用Ⅷ-Ab 进行细胞免疫化学鉴定；CCK-8 法检测高糖下不同浓度药物HDI 作用HRCECs 的增殖；用免疫细胞化学（Immunocytochemi-stry，ICC）法和酶联免疫吸附法(Enzy-melinked immunosorbent assay,ELISA 法) 检测不同浓度药物HDI作用HRCECs 后VEGF表达的变化。结果1、ICC 检测体外培养的HRCECsⅧ因子相关抗原抗体染色阳性。2、CCK-8 法结果显示，用6.25ml/L、12.5ml/L、25ml/L、50ml/L的HDI处理HRCECs 培养24h、48h 和72h，随HDI浓度增加和时间延长，HDI对HRCECs的抑制作用越强。作用24h 细胞增殖抑制率分别为3.58±1.06%、8.92±3.32%、15.68±3.18%、33.17±2.49%；作用48h 细胞增殖抑制率分别为4.17±1.53%、14.09±2.98%、31.40±3.71%、45.95±2.63%；作用72h 细胞增殖抑制率分别为4.53±1.09%、24.18±6.53 %、47.62±2.96%、63.14±3.37%；HDI作用组与高糖对照组之间、高糖与低糖对照组之间的差异均具有显著性(P0.05)。3、免疫细胞化学法（ICC）和酶联免疫吸附法(ELISA)检测12.5ml/L、25ml/L、50ml/L的HDI处理HRCECs 培养72h 后VEGF的表达，随着HDI浓度增高VEGF表达量减少，统计显示HDI2干预组间及其与高糖对照组间灰度值及OD值差异均具有显著性(P0.05)。HDI能下调VEGF的表达，呈剂量依赖性。结论HDW对HRCECs的增殖有抑制作用，呈时间和剂量依赖性；并能下调细胞VEGF的表达，抑制新生血管形成；其在DR视网膜新生血管（Retinal neovasculariza-tion，NVR）的治疗方面有重要应用价值。关键词白花蛇舌草；人视网膜血管内皮细胞；糖尿病视网膜病变；VEGF3Effectsofhedyotisdiffusawildonhuman retinalcapillaryendothelialcells,proliferationandexpressionofVEGFAbstractＯbjectiveTheintentionwastoprobetheeffectofhumanretinalvascularendothelialcell proliferationanditsVEGFexpressiononhedyotisdiffusainjectionanditsangiogene-sisinhibitionmechanisminhighglucoseenvironment,andtoprovideanewtreatme-nt forDiabeticretinopathy.MethodsFⅧr-AbwasidentifiedHRCECswhichwereculturedinvitro.Thecultured HRCECsweredealedwithdifferentconcentrationofhedyotisdiffusainjection,the influenceofcellproliferationwassurveyedbyCCK-8.TheVEGFexpressionof HRCECswasidentifiedbyusingICC(Immunocytochemistry)testandELISA(Enzy-melinked immunosorbent assay).Results1.ICCassayindicatedthatinHRCECstheexpressionofFⅧr-Agwaspositive.2. CCK-8 assayindicated that with6.25ml/L、12.5ml/L、25ml/L、50ml/LHDItreatmentunderhighglucose,itinhabitedtheabilityofHRC